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發(fā)布時間:2020-12-21 03:38  
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三(羥)Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會被去質(zhì)子化,從而提高其溶解性。人們常常在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。如果將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),而換成硼酸則獲得“TBE緩沖液這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實驗中。
Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長。Tris緩沖液的低離子強度特點可用于線蟲(C. elegans)核纖層蛋白(lamin)的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些的中間物。Tris也被用作滴定標準物。緩沖特性Tris為弱堿,在室溫(25℃)下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應注意溫度對于Tris的pKa的影響。
提到緩沖液就不得不延伸一下,這就是Henderson-Hasselbalch方程。
在前面提到,
將等式同時取對數(shù),并簡化就可以得到:
或者
這就是Henderson-Hasselbalch方程。
注意:式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時的濃度,除了酸性過于強的情況下,由于同離子效應的存在,一般都可用此式計算。
TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl,NaCl,tween20這三種物質(zhì),是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì),并且維持一個接近的天然環(huán)境。其中,Tween是一種離子表面活性劑,可加速非特異性結(jié)合的分離。因為Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,孵育過程中,能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高,在孵育后,混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的洗掉,增加特異性。