Southern雜交

實驗原理

      Southern印跡雜交（Southern blot）是1975年由英國人southern創(chuàng)建，是研究DNA圖譜的基本技術。RNAi提供了一種經(jīng)濟、快捷、gao效的抑制特異基因表達的技術手段,該技術已被廣泛用于研究基因功能和chuan染性疾病及惡xingzhong瘤基因zhi療領域。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNAl片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNAl片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結(jié)構(gòu)的標記探針進行雜交，用放l射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。

在玻璃燒杯中注入去離子水，加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%（DEPC-H2O）。（DEPC二焦碳酸酯為活性很強的物，須在通風櫥中小心使用）

將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中，注入DEPC-H2O，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中，在通風柜中37℃ 或室溫下處理過夜。

將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中，將裝有DEPC- H2O 處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口，高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。

滅菌塑料制品烘烤干燥，置潔凈處備用。

玻璃和金屬物品250 ℃烘烤3小時以上。

25.PCR擴增不出就引物有問題嗎？

答：基本不是。據(jù)估計,在人類基因組中,大約每千個堿基中有一個SNP,無論是比較于度多態(tài)性(RFLP)分析還是微標記(STR),都要廣泛得多。當今發(fā)展出各色各樣的PCR擴增技術，各色各樣的高溫聚合酶，就是來解決PCR擴增中遇到的擴不出、擴增效率低的問題。如巢式PCR就是擴增那些拷貝數(shù)很低的基因片段。 有些重復片段的擴增, GC含量高的片段，非要采用特殊擴增手段才能擴增出了。

引物擴增不出，主要是下列兩種情況比較常見：

（1） RT-PCR。請注意，很多基因通過常規(guī)RT -PCR方法是很難擴增出來的。 RT- PCR成功的關鍵在于RT的反應的RNA質(zhì)量和目標基因在特定組織和細胞中含量。

（2）從基因組中擴增。一般情況下，基因在基因組中都是單拷貝，基因組作為模板需要嚴格控制用量?；蚪MDNA過高，會影響反應體系中的Mg和pH