腦組織組化實驗

1. 灌注固定用的針頭，一般都用注射針頭。灌注大鼠一般可用 10 到 12 號針頭，小鼠可用 6、7 號針頭，但很重要的一點是要把針頭的磨鈍而不是用銳利的針頭。

2. 關于穿刺：灌注大鼠時要把穿刺針的插入到升主動脈內，但不宜進入升主動脈過長，在動脈內見到針頭或插入約 1mm 左右即可；灌注小鼠時只要把針頭插入左心室內即可，不必要插入到升主動脈內。操作的要點是：，操作要迅速，剪開膈肌后，迅速沿腋前線剪開胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心臟；第二，一定要在明視野下操作，要剪開心包壁層的前壁，暴露升主動脈和肺動脈干的根部，確保穿剌針能進入升主動脈；第三，穿刺之前要用適當大小的血管鉗夾住心室以固定心臟，但不要夾得過緊，要讓心腔內留有一定的間隙，然后在心尖處輕輕旋轉針頭插入穿刺針。也可以用小剪刀在心尖處先剪開一個小口再插入穿刺針；第四，穿刺方向要正確，從心尖部開始，從左下方斜向右上方，若遇阻力要改變方向再試，不要用力蠻插。

3. 灌注用生理鹽水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以從右心耳流出的液體清亮為標準；4% 多聚甲醛用量約相當于老鼠體重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持續(xù) 1-2 個鐘頭，也可以稍快。取腦后置腦塊于 4% 多聚甲醛內 4 度后固定 4-6 個鐘頭。

注意事項

1. 針頭大小與動物的種類有關，t 同時針頭一定要磨鈍。

2. 檢查灌注泵的運作情況，一定排出管子的氣泡和空氣，防止空氣栓塞。

3. 經腹腔暴腔，先清楚升主動脈外面的脂肪組織和心外膜組織。

4. 將針頭經左心室插入升主動脈（顏色變白的哦），并用鉗子固定。

5. 解開右心耳，同時開啟灌注泵。注意，不要隨便揭開心臟的其他部位，否則有時候可能會灌注成功但是絕大部分會造成灌注不成功，尤其。

6. 將 4 度的生理鹽水（好已動物的發(fā)白為標準，我們實驗室的大鼠約用 250ml）和多聚甲醛 (根據所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整個過程均應將動物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。

1.3改良多平臺睡眠剝奪法

在MMPM 中將 10 只大鼠(具體數目可根據實際需要確定)同時放在裝有 14 或 15 個臺的水槽中(長 127 cm ，寬 44 cm ，高 45 cm )進行實驗，這樣既避免了 SP及M P中單只大鼠與群體隔離的缺點，又保留了 M P 中活動范圍增大的特點，因在實驗時大鼠多是 3 只或 4 只一籠進行飼養(yǎng)，如 1 組實驗需 10 只大鼠，則需要3籠或 4籠大鼠，考慮到來自不同籠的大鼠放在一起實驗也可能造成群體的不穩(wěn)定，有學者將實驗方法進一步改良，將實驗所需的 10 只大鼠放在同一只籠中飼養(yǎng) 2 周，實驗時再將這些大鼠放在一起同時進行睡眠剝奪實驗，這樣以克服實驗時大鼠群體不穩(wěn)定的缺點，從而將實驗時的不確定因素減至低! 實驗研究發(fā)現在MMPM中"經采取措施保持大鼠群體穩(wěn)定性及避免大鼠與群體分離后" 大鼠上腺重量%體重減輕量%中促上腺皮質(A CTH )和上腺皮質酮 (CO RT) 的含量均較M P中為低，提示M M PM 較 M P 具有更低的應激性，是較為理想的REM 剝奪方法。

3輕柔刺激法

此方法在短期的睡眠剝奪實驗中應用較多，當實驗人員通過觀察大鼠行為或通過腦電波監(jiān)護觀察到大鼠進入睡眠時，通過輕輕拍打大鼠籠子或應用聲音、光線的刺激促使大鼠保持清醒，必要時還可用紙卷、鉛筆或用手直接觸摸大鼠使大鼠無法進入睡眠。注意不能將大鼠移出籠外!此方法簡單易行，在腦電監(jiān)護情況下可進行 TSD 或 SSD 實驗，在無腦電監(jiān)護時需要實驗人員在旁不間斷觀察大鼠行為，故較適合行短時間的睡眠剝奪實驗。

4睡眠剝奪法

定時給大鼠注射， 此類方法簡單易行，操作方便，不需要特殊儀器。缺點是大鼠存在個體差異， 睡眠剝奪的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊藥理作用的實驗中。