DNA連接酶與DNA聚合酶用途不同

DNA連接酶主要用于基因工程，將由限制性核酸內(nèi)切酶“剪”出的粘性末端重新組合，故也稱“基因針線”。如基因工程中，大腸桿1菌連接酶連接黏性末端，T4連接酶既可連接黏性末端，又可連接平末端。

DNA聚合酶在DNA copy中起做用，主要是連接DNA部分片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

基因的分子手術(shù)是相當(dāng)復(fù)雜的過程，其中zui重要的是連接酶

互補(bǔ)堿基之間的配對(duì)，形成雙鏈。并在DNA連接酶的作用下，使同一DNA分子的兩端連接成環(huán)狀，或使兩個(gè)分子連成一大的線狀分子。不同限制性內(nèi)切酶切割DNA產(chǎn)生的三種不同類型的末端。

基因的分子手術(shù)是相當(dāng)復(fù)雜的過程，除了需要限制性內(nèi)切酶外，還需要其他- -些工具酶包括連接酶、DNA 聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、末端修飾酶等，對(duì)DNA或RNA進(jìn)行各種各樣的修飾。其中zui重要的是連接酶。

T4 RNA連接酶

用途：用RNA 3'末端標(biāo)記；RNA和RNA分子間連接；寡核苷酸的環(huán)化；tRNA修飾；5' RACE中寡核苷酸連接到cDNA單鏈；在蛋白質(zhì)特定位點(diǎn)引入非天然氨基酸。

來源：由大腸桿1菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為T4嗜菌體。

活性定義：37℃30分鐘內(nèi)，催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環(huán)形產(chǎn)物所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。

活性檢測(cè)條件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。

純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶儲(chǔ)存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。