營(yíng)養(yǎng)條件

1．培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基包含細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等。針對(duì)不同細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細(xì)胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是細(xì)胞外基質(zhì)、生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血1清。要根據(jù)不同的細(xì)胞和不同的研究目的決定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能維持細(xì)胞較快的生長(zhǎng)增殖速度，稱為生長(zhǎng)培養(yǎng)液；為維持細(xì)胞緩慢生長(zhǎng)或不死，添加2%～5%的血1清即可，稱為維持培養(yǎng)液。但血1清中也存在有害于細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的物質(zhì)，如補(bǔ)體、免1疫球蛋白和一些生長(zhǎng)抑制因子；成分不明確，影響對(duì)結(jié)果的分析；不同動(dòng)物、不同批次的血1清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。

谷氨酰胺是細(xì)胞生長(zhǎng)重要的氮源，在細(xì)胞生長(zhǎng)代謝過(guò)程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

iPS細(xì)胞這一名詞，全稱為誘導(dǎo)性多能ips（induced pluripotent stem cell），縮寫(xiě)名來(lái)源于各個(gè)英文單詞的首字母。

胚胎iPS的獲取，不可避免的要嚴(yán)重的傷害乃至殺1死胚胎，這在很多國(guó)家已經(jīng)是法律上的殺1人罪行了。所以，胚胎iPS的相關(guān)研究在各國(guó)都受到嚴(yán)格監(jiān)管，實(shí)質(zhì)上陷于停頓，而iPS細(xì)胞就不存在這樣的倫1理問(wèn)題，無(wú)需受精卵或胚胎，僅僅是提取一些體細(xì)胞，就可以將其轉(zhuǎn)化為與胚胎iPS相同的多能細(xì)胞，可謂是巨大的進(jìn)步了。

細(xì)胞的鑒定

1. u表面標(biāo)志分子鑒定iPS細(xì)胞能夠表達(dá)多能iPS細(xì)胞特異的表面標(biāo)志分子，如：ssea-1（階段特異性胚胎抗原1），ssea-3等。這些物質(zhì)在已分化體細(xì)胞表面不表達(dá)，從而鑒定。

2. u表觀遺傳狀態(tài)鑒定iPS細(xì)胞與ES細(xì)胞具有相似的DNA甲1基化模式和組蛋白修飾情況。iPS細(xì)胞中的多能基因，如oct-4，Nanong等的啟動(dòng)子區(qū)域CpG島從高甲1基化轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃艵S細(xì)胞的低甲1基化狀態(tài)。

3.u基因表達(dá)模式和發(fā)育潛能鑒定d. uES和iPS細(xì)胞基因表達(dá)譜基本相同。iPS細(xì)胞具有發(fā)育為三個(gè)胚層的能力，并能參與生殖系的發(fā)育，這與ES細(xì)胞相同。iPS細(xì)胞的多能基因啟動(dòng)子區(qū)域具有與ES細(xì)胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。