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植物原位雜交服務(wù)公司在線咨詢「邁斯普」

發(fā)布時(shí)間:2021-08-17 05:00  

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作用信號(hào)是在融合基因表達(dá)后, 在細(xì)胞內(nèi)重建轉(zhuǎn)錄因子的作用而給出的, 省去了純化蛋白質(zhì)的繁瑣步驟。檢測(cè)在內(nèi)進(jìn)行, 可以在一定程度上代表細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)情況。檢測(cè)的結(jié)果可以是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng), 因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用。


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單獨(dú)的BD雖然能和啟動(dòng)子結(jié)合,但是不能轉(zhuǎn)錄。而不同轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細(xì)胞的Gal4蛋白的BD與大腸的一個(gè)酸性結(jié)構(gòu)域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結(jié)合到Gal4結(jié)合位點(diǎn)并轉(zhuǎn)錄。


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網(wǎng)上有很多關(guān)于FISH的實(shí)驗(yàn)步驟教程,但每個(gè)探針盒子的操作可能存在差異。懂了原理,才能以不變應(yīng)萬(wàn)變。

FISH的大致步驟分為探針變性、標(biāo)本變性、雜交、洗脫、雜交信號(hào)放大(適用于適用生物素標(biāo)記的探針)、復(fù)染、封片、熒光顯微鏡觀察FISH結(jié)果。