DNA連接酶不需要模板，因為DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來。用DNA連接酶連接具互補粘性末端的DNA1片段或是用T4DNA連接酶直接將平末端的DNA1片段連接起來。

DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈。DNA聚合酶的結構是三磷酸腺苷。

DNA 連接酶是生物體內重要的酶，其所催化的反應在DNA的copy和修復過程中起著重要的作用。DNA連接酶分為兩大類:一類是利用ATP 的能量催化兩個核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴ATP的DNA 連接酶，另一類是利用煙酰胺腺piao呤二核苷酸(NAD ) 的能量催化兩個核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴NAD* 的DNA 連接酶。

DNA連接酶（DNA Ligase）也稱DNA黏合酶，在分子生物學中扮演一個既特殊又關鍵的角色，那就是連接DNA鏈3‘-OH末端和，另一DNA鏈的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連成完整的鏈。連接酶的催化作用需要消耗ATP。

制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分 [2]  。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異結合所表達的蛋白質(抗原)，則可從沉淀的核糖體中分離出胰島素特異的mRNA，一般特異mRNA只是細胞總mRNA中的次要成分。在這種情況下，不得不以密度梯度離心，按分子量大小把總mRNA分開，然后把分離開的mRNA直接用于試管中表達蛋白質(用家兔網織細胞的溶胞產物或小麥胚芽提取物作為翻譯系統的誘導物)再用沉淀或聚酰胺凝膠電泳從許多表達的蛋白中測定出目的蛋白，從而確定表達該蛋白的特異mRNA。