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原位雜交電話「在線咨詢」

發(fā)布時(shí)間:2021-08-29 14:34  

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原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精0準(zhǔn)確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱為原位雜交。

使用DNA或者RNA探針來檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。



原位雜交是指;分子雜交的一種形式。由未經(jīng)抽提分離的染色體DNA,在原來位置上被變性成單鏈后,與探針進(jìn)行分子雜交。1977年由本頓(W.D.Benton)和戴維斯(R.W.Davis)在原分子雜交基礎(chǔ)上發(fā)展的一種較新的分子雜交技術(shù)。方法是將菌落或噬菌斑轉(zhuǎn)移到硝9酸纖維素濾膜上,使在原位發(fā)生溶菌后變性的DNA,同濾膜原位結(jié)合,再與有放5射性同位素標(biāo)記的特定核苷酸“探針”雜交,其結(jié)果可用放5射自顯影來顯示,出現(xiàn)銀粒的地方便是待測(cè)染色體DNA上與探針互補(bǔ)順序所在的位置。對(duì)快速檢測(cè)轉(zhuǎn)化群落中的DNA序列或任何一種插入的DNA序列,以及動(dòng)植物的基因定位工作,都具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養(yǎng)技術(shù)”)



在選用探針時(shí)經(jīng)常會(huì)受到可利用探針種類的限制。如在建立DNA文庫時(shí),手頭沒有篩選特定基因的克0隆探針,這時(shí)就可用寡核苷酸探針來代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白,并測(cè)定6個(gè)以上的末端氨基酸序列,通過反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動(dòng)物的同種基因克0隆,因?yàn)槿祟惡蛣?dòng)物間在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性,因此可利用已鑒定的動(dòng)物基因作探針來篩選人類基因克0隆。對(duì)于基因核苷酸序列背景清楚而無法獲得克0隆探針時(shí),可采用PCR方法擴(kuò)增某段基因序列,并克0隆人合適的質(zhì)粒載體中,即可得到自己的探針。這種方法十分簡(jiǎn)便,無論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得,而且,可以建立PCR的基因檢測(cè)方法,與探針雜交方法可作對(duì)比,可謂一舉兩得。