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血液RNA提取常用指南「友名生物」

發(fā)布時間:2021-09-27 12:27  

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人ELISA試劑盒的原理及優(yōu)勢:

  1、ELISA是以immune學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、antibody的特異性反應(yīng)與酶對底物的有效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

  2、由于抗原、antibody的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

  3、Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在immune學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

  4、ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血1清或血漿中的抗人類HEV病毒Mantibody ELISA檢測。

  5、ELISA的基礎(chǔ)是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或antibody仍保持其immune學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或antibody既保留其immune學(xué)活性,又保留酶的活性。





小分子類物質(zhì)包含多肽、天然小分子、化學(xué)合成小分子等一系列的物質(zhì),被廣泛用于medicine等各個領(lǐng)域。以往小分子的定量檢測主要通過氣相和液相色譜完成,存在周期長,檢測儀器價格昂貴等多方面的不足。那么immune檢測技術(shù)可以用于定量檢測小分子嗎?

免1疫檢測試劑盒的技術(shù)基礎(chǔ)就是抗原和抗1體的特異性結(jié)合,小分子特異性抗1體的制備即是小分子immune檢測試劑盒制備的關(guān)鍵之處。小分子由于分子量小,結(jié)構(gòu)簡單,在免1疫學(xué)上劃歸為半抗原(Hapten),即只有immune反應(yīng)性而沒有immune原性的一類物質(zhì),不能直接刺激機(jī)體產(chǎn)生antibody但是卻擁有和antibody結(jié)合的特性。隨著抗1體制備技術(shù)的發(fā)展,小分子特異性抗1體的制備技術(shù)顯得更為多元化



隨著基因組測序、分子生物學(xué)檢測手段的快速發(fā)展,PCR和熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),正在越來越多的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。然而,PCR作為一種高靈敏度的檢測手段,PCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也容易被各種無關(guān)的外源性DNA或RNA所干擾。

PCR實(shí)驗(yàn)室中,很容易發(fā)生DNA的交叉污染,污染通常來自于離心管、移液器和其他試驗(yàn)設(shè)備產(chǎn)生的DNA氣溶膠,或DNA溶液污染桌面,或吸樣槍不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)。據(jù)估算,一個氣溶膠顆??珊?8000個DNA拷貝。 因此,為保證PCR試驗(yàn)的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,避免交叉污染,應(yīng)定期對PCR實(shí)驗(yàn)室做DNA污染情況的監(jiān)測。




用乙醇沉淀DNA時為什么一定要加NaAc或NaCl

  在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負(fù)電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,使Na 中和DNA分子上的負(fù)電荷, 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀,當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時, 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合,這樣就造成DNA沉淀不完全,當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時, 其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于過多的鹽雜質(zhì)存在,影響DNA的酶切等反應(yīng),必須要進(jìn)行洗滌或重沉淀。

  加核糖核酸酶降解核糖核酸后,為什么再要用SDS與KAc來處理?

  加進(jìn)去的RNase本身是一種蛋白質(zhì),為了純化DNA,又必須去除之,加SDS可使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀,再加KAc使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物,使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到較好效果。

  在基因操作實(shí)驗(yàn)中,磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH),可作DNA的保存液,但在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時,磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2 產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀,在DNA反應(yīng)時,不同的酶對輔助因子的種類及數(shù)量要求不同,有的要求高離子濃度,有的則要求低鹽濃度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng),由于緩沖液是TrisH /Tris,不存在金屬離子的干擾作用,故在提取或保存DNA時,大都采用Tris-HCl系統(tǒng),而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定。