低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開(kāi)傘、未裂破的子實(shí)體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)熏蒸消毒12 ～ 24 小時(shí)，再按無(wú)菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過(guò)菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開(kāi)傘或未開(kāi)裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕（即孢子?。?。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤(pán)等組成。鐘罩下為一搪瓷盤(pán)，直徑25 厘米左右，盤(pán)內(nèi)先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無(wú)菌室或無(wú)菌箱內(nèi)。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實(shí)體，插在收集器內(nèi)的三角架頂上（若無(wú)孢子收集器，也可用培養(yǎng)皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)24 小時(shí)，培養(yǎng)皿中便可見(jiàn)到白色粉狀物，此即為孢子。此時(shí)，可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi)，取出培養(yǎng)皿，蓋好，并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10 ～ 20 毫升的無(wú)菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無(wú)菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養(yǎng)基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養(yǎng)5 ～ 7 天，培養(yǎng)基上便可長(zhǎng)出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時(shí)，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)白色菌絲長(zhǎng)滿試管時(shí)，便得純菌種。

低溫生物菌種的工藝介紹

現(xiàn)有生化工藝有活性污泥法、生物接觸氧化、MBBR、MBR等，這些工藝在常溫下均可實(shí)現(xiàn)氨氮的有效去除并達(dá)標(biāo)，這時(shí)好氧系統(tǒng)中占主導(dǎo)地位的是中溫（微生物）硝化菌，硝化菌分自養(yǎng)硝化細(xì)菌和異樣硝化菌。

自養(yǎng)硝化菌生長(zhǎng)繁殖緩慢，在活性污泥系統(tǒng)中無(wú)法與異養(yǎng)細(xì)菌競(jìng)爭(zhēng)，難以維持較高的細(xì)胞濃度，需要保持較長(zhǎng)的污泥停留時(shí)間來(lái)取得較好的脫氮效果，易受外界環(huán)境影響，對(duì)環(huán)境沖擊尤其是毒物沖擊非常敏感，硝化系統(tǒng)很容易崩潰，要經(jīng)常不斷的馴化和培養(yǎng)。

低溫生物菌種的主要作用是什么呢？

增進(jìn)土壤肥力

這是微生物肥料的主要作用之一。例如各種自生、聯(lián)合或共生的固氮微生物肥料，可以增加土壤中的氮素含量；多種溶磷、解鉀的微生物，如芽孢菌、假單胞菌的應(yīng)用，可以將土壤中難溶的磷、鉀分解出來(lái)，轉(zhuǎn)變?yōu)樽魑锬芪绽玫牧住⑩浕衔?，使作物生長(zhǎng)環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)元素供應(yīng)增加。一些微生物肥料的應(yīng)用，增加了土壤中的有機(jī)質(zhì)，提高了土壤的肥力。

微生物菌種的施用條件

與其他肥料一樣，正確的施用微生物肥料才能發(fā)揮其肥效。微生物肥料的有效使用條件包括：

1、禁忌與化肥、殺蟲(chóng)劑等的合用、混用。

2、與所使用地區(qū)的土壤、環(huán)境條件相適宜。微生物菌肥在土壤持水量30%以上、土溫度在10～40℃、pH在5.5～8.5的土壤條件下均可施用。但是，不同微生物具不同的生態(tài)適應(yīng)能力，因而微生物肥料在推廣使用前，要進(jìn)行科學(xué)的田間試驗(yàn)，以確定其肥效。

3、對(duì)溫度、水分有一定要求。避免在高溫干旱條件使用。在高溫干旱條件下，生存和繁殖就會(huì)受到影響，不能發(fā)揮良好的作用。應(yīng)選擇陰天或晴天的傍晚使用這類(lèi)肥料，并結(jié)合蓋土、蓋糞、澆水等措施，避免微生肥料受陽(yáng)光直射或因水分不足而難以發(fā)揮作用。此外，如根瘤菌、菌根菌肥料等對(duì)宿主有很強(qiáng)的專(zhuān)一性，使用時(shí)應(yīng)予考慮。