營養(yǎng)條件

1．培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基包含細(xì)胞生長所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素等。針對(duì)不同細(xì)胞的營養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細(xì)胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是細(xì)胞外基質(zhì)、生長因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血1清。要根據(jù)不同的細(xì)胞和不同的研究目的決定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能維持細(xì)胞較快的生長增殖速度，稱為生長培養(yǎng)液；為維持細(xì)胞緩慢生長或不死，添加2%～5%的血1清即可，稱為維持培養(yǎng)液。但血1清中也存在有害于細(xì)胞生長和繁殖的物質(zhì)，如補(bǔ)體、免1疫球蛋白和一些生長抑制因子；成分不明確，影響對(duì)結(jié)果的分析；不同動(dòng)物、不同批次的血1清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。

谷氨酰胺是細(xì)胞生長重要的氮源，在細(xì)胞生長代謝過程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

細(xì)胞傳代

細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25?TA的胰蛋白酶，放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞的多能性受到轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)和表觀遺傳學(xué)的復(fù)雜調(diào)控，那么，僅僅依靠導(dǎo)人的幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子是如何完成這一復(fù)雜的任務(wù)，從而誘導(dǎo)出具有多能性的細(xì)胞呢?深入研究體細(xì)胞重編程的分子機(jī)制，調(diào)控機(jī)制以及體外定向誘導(dǎo)分化機(jī)制也是未來研究的重要任務(wù)之一。

1，逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體導(dǎo)致tumour發(fā)生的潛在風(fēng)險(xiǎn)需要加以有效防范。

2，需要深入研究比較iPS細(xì)胞和hES細(xì)胞在細(xì)胞生物學(xué)的特性、 定向分化機(jī)制等方面是否具有顯著的差異。

3，需建立一種新的方法以避免基因轉(zhuǎn)染或基因轉(zhuǎn)導(dǎo)帶來的潛在風(fēng)險(xiǎn), 如通過某些化學(xué)物品或因子喚醒體細(xì)胞中固有的上述轉(zhuǎn)錄因子的方式以替換外源性基因轉(zhuǎn)染的方式, 或者用某些因子的短暫性表達(dá)代替永1久性導(dǎo)入。