{微生物檢測}微生物分離純化

含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物(mixed culture)。如果在一個菌落中所有細(xì)胞均來自于一個親代細(xì)胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)(pureculture)。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、fangshe法、四格法等。在進(jìn)行junzhong鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化，方法有許多種。

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)?！称肺⑸镯椖勘尘啊吃床≡⑸镆鸬氖吃葱约膊∈鞘称钒踩暮诵膯栴}。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。

2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃guadao把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。

3、平板劃線法

zui簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。7-2013食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗副溶血性弧菌檢驗GB4789。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、fangshe法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，后在所劃的線上分散著單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個細(xì)胞長成一個菌落。

抑菌效力

抑菌劑效力測定用培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查，包括成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。

7.2試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從保藏中心獲得的冷凍干燥為第0代），并采用適宜的保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。

銅綠假單胞菌     （Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕

大腸埃希菌        （Escherichia coli） 〔CMCC(B) 44 102〕

金黃色菌 （Staphylococcus aureus）〔CMCC(B)26 003〕

白色菌         （Candida albicans） 〔CMCC(F) 98 001〕

黑曲霉                （Aspergillus  niger） 〔CMCC(F)

98 003〕

黑曲霉菌懸液：操作時關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)及潔凈工作臺風(fēng)機。要求檢查沙門菌的供試品，其檢驗量應(yīng)增加20g或20ml(其中10g或者10ml用于陽性對照試驗)。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至           ，用比濁法制成每1ml含孢子數(shù)108cfu的孢子懸液。

非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

   4.非無菌含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表2。

   5.非無菌藥用原料及輔料的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表3。

   6.中藥提取物及中藥飲片的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表4。

   7. 有兼用途徑的制劑

   應(yīng)符合各給藥途徑的標(biāo)準(zhǔn)。

   非無菌藥品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）” 檢查；非無菌藥品的控制菌照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法（通則1106）” 檢查。厭氧的方法可用物理、化學(xué)、生物等辦法使培養(yǎng)容器內(nèi)的氧氣部分或全部消除。各品種項下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)解釋如下：

   l0^1cfu：可接受的zui大菌數(shù)為20；

   10^2cfu：可接受的zui大菌數(shù)為200；

   10^3cfu：可接受的zui大菌數(shù)為2000；依此類推。

   本限度標(biāo)準(zhǔn)所列的控制菌對于控制某些藥品的微生物質(zhì)量可能并不quan面，因此，對于原料、輔料及某些特定的制劑，根據(jù)原輔料及其制劑的特性和用途、制劑的生產(chǎn)工藝等因素，可能還需檢查其他具有潛在危害的微生物。