ELISA試劑盒的用途

ELISA的基礎是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或仍保持其活性，酶標記的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的或抗原）與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定。

然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。

ELISA試劑盒的操作方法——間接法

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1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.然后用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。

ELISA試劑盒——會出現的問題及解決辦法

陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

c.原因：添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

Elisa試劑盒的優(yōu)點

1．特異性強：不與其它細胞反應。

2．重復性好：板內、板間變異系數均小于10%。

3．穩(wěn)定性高：實驗效果很穩(wěn)定。

4．超靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品，稀釋度和樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

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