微生物計(jì)數(shù)

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)法

將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下計(jì)算4~5個(gè)中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌。

②對(duì)壓在小方格界線上的細(xì)菌，應(yīng)當(dāng)取平均值計(jì)數(shù)。

③此法可用于測(cè)定培養(yǎng)液中酵母jun種群數(shù)量的變化

2.稀釋涂布平板法

原理:每個(gè)活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長(zhǎng)條件下可以通過生長(zhǎng)形成菌落。培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。

①這一方法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目

②統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個(gè)活多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測(cè)定。但不適于測(cè)定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等。

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計(jì)數(shù)，這樣又稱涂片計(jì)數(shù)法。染色可用臺(tái)盼藍(lán)，臺(tái)盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色，可分別計(jì)數(shù)死細(xì)胞和huo細(xì)胞。

微生物限度檢查

2.接種和稀釋

   按下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗(yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇zui低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。

   （1）試驗(yàn)組 取上述制備好的供試液，加入試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。

   （2）供試品對(duì)照組 取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。

   （3）菌液對(duì)照組取 不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液，按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。

   若因供試品抗jun活性或溶解性較差的原因?qū)е聼o法選擇zui低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采用適宜的方法對(duì)供試液進(jìn)行進(jìn)一步的處理。就是說這種微生物在培養(yǎng)時(shí)，需要有氧氣加入，否則就不能生長(zhǎng)良好。如果供試品對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制作用無法以其他方法消除，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗(yàn)菌懸液進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。

   （3）MPN法 MPN法的精密度和準(zhǔn)確度不及薄膜過濾法和平皿計(jì)數(shù)法，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒有適宜計(jì)數(shù)方法的情況下使用，本法不適用于霉菌計(jì)數(shù)。若使用MPN法，按下列步驟進(jìn)行。

   取照上述“供試液的制備”“接種和稀釋”和“抗jun活性的去除或滅活”制備的供試液至少3個(gè)連續(xù)稀釋級(jí)，每一稀釋級(jí)取3份1ml分別接種至3管裝有9～10ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，同法測(cè)定菌液對(duì)照組菌數(shù)。7-2013食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)GB4789。必要時(shí)可在培養(yǎng)基中加入表面活性劑、中和劑或滅活劑。

   接種管置30～35℃培養(yǎng)3天，逐日觀察各管微生物生長(zhǎng)情況。供試品檢查時(shí)，如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑，應(yīng)證明其有效性及對(duì)微生物無毒性。如果由于供試品的原因使得結(jié)果難以判斷，可將該管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)1～2 天，觀察是否有微生物生長(zhǎng)。根據(jù)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)從表3查被測(cè)供試品每1g或每1ml中需氧菌總數(shù)的可能數(shù)。