高效液相色譜

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ﹨ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。

高效液相色譜的歷史

1903年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（Tswett）初次提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography （來(lái)自希臘字， chroma 意思是顏色， graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄）來(lái)描述他的彩色試驗(yàn)。（令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年，英國(guó)學(xué)者M(jìn)artin和Synge 基于他們?cè)诜峙渖V方面的研究工作，提出了關(guān)于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術(shù)向前推進(jìn)了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導(dǎo)致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個(gè)重要嘗試，但分離效率尚不理想。1960年中后期，氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展，以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步，液相色譜又開(kāi)始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后，微處理機(jī)技術(shù)用于液相色譜，進(jìn)一步提高了儀器的自動(dòng)化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計(jì)劃，蛋白質(zhì)組學(xué)有HPLC作預(yù)分離等。

HPLC對(duì)流動(dòng)相的一般要求

流動(dòng)相就比如人體的血液，其質(zhì)量直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行與否。

© 應(yīng)該使用HPLC級(jí)的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！

© 注意溶劑的截止波長(zhǎng)。截止波長(zhǎng)是指該溶劑可以在紫外檢測(cè)器中使用的很低波長(zhǎng),低于該波長(zhǎng)后,溶劑會(huì)有很強(qiáng)的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對(duì)所分析物質(zhì)的檢測(cè)。

© HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾過(guò)的。建議每天更換新鮮的水。長(zhǎng)期不用時(shí)，必須把使用水的管路用有機(jī)的溶劑置換，防止長(zhǎng)霉。

© 儀器使用完后要采用適當(dāng)?shù)娜軇_洗等方法維護(hù)色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

© 當(dāng)有流路堵塞時(shí)，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長(zhǎng)將會(huì)縮短溶劑過(guò)濾器的使用壽命，并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。