ELISA試劑盒的成分

1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標記: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標記稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記和顯色劑)

ELISA試劑盒——會出現(xiàn)的問題及解決辦法

吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時間超過太久。

解決辦法：請控制反應(yīng)時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色 棄去底物，重新配置

3  樣品稀釋液污染 棄去稀釋液，重新配置

4  吸頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底 吸頭盡可能一次性使用

5  不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間） 常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說明書要求。

6  偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高 按照說明書調(diào)整到合適的濃度

7  ELISA板子不正確的貯存 酶標板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點的Elisa板

8  沒有正確封閉 在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間

9  樣本溶血嚴重 建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴重溶血樣本會導致背景偏高。