細(xì)胞復(fù)蘇凍存袋

1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。

2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻；

3. 離心， 1000rpm，5min；

4. 棄去上清液，加入含10%小牛血培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存步驟

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍;

2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化;

3.待消化到位后加入適量血漿或完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min;

4.配制凍存液，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107 cells/mL，轉(zhuǎn)移到凍存管中;

5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

6.凍存細(xì)胞后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長期保存，

為穩(wěn)妥起見可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長情況，再繼續(xù)凍存

凍存袋的應(yīng)用

對于需要保存5年以上的體外細(xì)胞的方法,-196°℃的深低溫液氮保存簡便,實用.凍存后的細(xì)胞損傷小活力高能保障患者移植后造血功能的早期恢復(fù),反之則導(dǎo)致造血功能恢復(fù)的延遲甚至失敗.原有的液氮罐保存方式是將裝有千細(xì)胞的凍存袋放入圓筒狀的容器中后,再放入液氮罐中保存,由于凍存袋與圓筒狀的容器形狀尺寸的不匹配冷凍保存時會造成凍存袋的變形導(dǎo)致千細(xì)胞被擠壓受損甚至消滅,且受液氮罐空間限制能凍存的數(shù)量有限.針對如何經(jīng)濟(jì),較大容量的保存細(xì)胞.