將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng)   基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。在生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融，使細(xì)胞團(tuán)塊化凍。 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細(xì)胞。 倒去上清液，重懸細(xì)胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

支原體污染細(xì)胞污染可分為細(xì)菌、霉菌、酵母菌、支原體污染，其中支原體污染發(fā)生的概率>50%。支原體(Mycoplasma) 是小的原核生物，約0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μm 過濾膜 （BI經(jīng)過3次0.1μm濾膜并且檢測支原體)。支原體污染棘手的原因之一是沒有如其他污染源“立即可辨”的現(xiàn)象，支原體污染侵襲細(xì)胞但是并不一定致死。如果您的細(xì)胞出現(xiàn)如下狀態(tài)：增殖變慢、形態(tài)變差、培養(yǎng)液變黃但是沒有渾濁，說明您的細(xì)胞可能正遭受支原體的摧殘！

如何避免細(xì)胞抱團(tuán)？細(xì)胞生長密度不要太高，70%－80％就好（細(xì)胞剛剛基本成單層細(xì)胞，沒有出現(xiàn)成層生長），這樣細(xì)胞抱團(tuán)的幾率就大大減少了。如果細(xì)胞已經(jīng)長成集落，可先將細(xì)胞低密度傳代，第二天再消化傳代，這樣連續(xù)傳三次，細(xì)胞抱團(tuán)的就越來越小，這樣幾代過后，再按照常規(guī)消化方法和時間能將細(xì)胞逐漸傳成單個的。用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞。

肌紅蛋白（myoglobin）:是由一條肽鏈和一個血紅素輔基組成的結(jié)合蛋白，是肌肉內(nèi)儲存氧的蛋白質(zhì)，它的氧飽和曲線為雙曲線型。血紅蛋白（hemoglobin）：是由含有血紅素輔基的4個亞基組成的結(jié)合蛋白。血紅蛋白負(fù)責(zé)將氧由肺運(yùn)輸?shù)酵庵芙M織，它的氧飽和曲線為S型。角蛋白（keratin）：由處于α-螺旋或β-折疊構(gòu)象的平行的多肽鏈組成不溶于水的起著保護(hù)或結(jié)構(gòu)作用蛋白質(zhì)。