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發(fā)布時(shí)間:2021-10-01 09:02  
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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。原位雜交技術(shù)因其高度的靈敏性和準(zhǔn)確性而日益受到許多科研工作者的歡迎,并廣泛應(yīng)用到基因定位、和基因圖譜的構(gòu)建等研究領(lǐng)域。
雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時(shí)應(yīng)避免膜干涸。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火溫度下復(fù)性。
探針的標(biāo)記物可以是性同位素,也可以是非性生物素和半抗原等,性同位素中,3H和35S為常用,3H標(biāo)記的探針半衰期長(zhǎng),成像分辨率高,便于定位,缺點(diǎn)是能量低,35S標(biāo)記探針活性較高,影像分辨率也較好,而32P能量過(guò)高,致使產(chǎn)生的影像模糊,不利于確定雜交位點(diǎn)。用于原位雜交的探針可以是單鏈或雙鏈DNA,也可以是RNA探針。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。目的探討熒光原位雜交技術(shù)(fluorescenceinsftuhybridization,F(xiàn)ISH)在復(fù)雜染色體異常產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。
原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)是 以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互 補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子??梢詸z測(cè) cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標(biāo)本,包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤(rùn),讓濾膜留于原處2-3分鐘。
取材與標(biāo)本固定
1. 取材 對(duì)于原位雜交所用的材料要盡可能新鮮,為了防止RNA的降解,取材要迅速,取材后要盡快固定或冷凍保存。
2.固定 進(jìn)行原位雜交的組織或細(xì)胞必須經(jīng)過(guò)固定處理,固定的目的是為了①保持細(xì)胞形態(tài)原有結(jié)構(gòu);②保存細(xì)胞內(nèi)的DNA或RNA的水平;③使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織內(nèi)。
3.固定液 常用固定液有10%甲醛、4%多聚甲醛、冰醋酸-酒精混合液、Bouin氏固定液等。這些固定液都有不同的優(yōu)缺點(diǎn)因此要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,選擇的固定液。
4.固定方法 組織標(biāo)本取材后,迅速放入固定液中2~4h,取材組織大小為1cm×1cm×0.5cm,不宜太大。必要時(shí),動(dòng)物組織可進(jìn)行灌流固定,然后將組織按要求取材放入20%蔗糖中,4℃過(guò)夜,次日可行冰凍切片。
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