就DNA探針和RNA探針的比較，DNA探針在雜交過程中會出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能，也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體，從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用，將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。

Tips：RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性，其檢測特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴增的方法，可以更方便地進行RNA探針的制備；RNA探針合成后，還需驗證其對目標片段檢測的靈敏度和特異性。

多彩色熒光原位雜交技術(shù)：顯而易見，是熒光原位雜交的升級版，采用多個熒光來檢測，目前的發(fā)展及運用也是較多的。

原位PCR：將原位雜交結(jié)合PCR技術(shù)發(fā)展起來的實驗方法。

基因組原位雜交技術(shù)：該技術(shù)在我們的領(lǐng)域可能運用的畢竟少，主要是根據(jù)物種DNA同源性差異實現(xiàn)，在農(nóng)作物等的雜交育種上運用較廣，

武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司；公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。

原位雜交組織（或細胞）化學(xué)技術(shù)簡稱原位雜交（In situ hybridization, ISH）是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標記物的核酸探針與組織細胞內(nèi)待測的核酸，按堿基互補配對原則進行特異性結(jié)合，形成雜交體，然后用與標記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng)，通過組織化學(xué)或免3疫組織化學(xué)方法在核酸原有位置進行細胞內(nèi)定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內(nèi)基因表達及有關(guān)細胞5因子的調(diào)控提供了有效的工具?？梢暈榻M織化學(xué)與免3疫組織化學(xué)的重大突破。

原位雜交不需要從組織中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保護組織和細胞的形態(tài)，更能準確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

雜交技術(shù)zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應(yīng)溫度。若反應(yīng)溫度低于Tm 10～15℃，堿基順序高度同源的互補鏈可形成穩(wěn)定的雙鏈，錯配對減少。若反應(yīng)溫度再低（Tm-30℃），雖然互補鏈之間也可形成穩(wěn)定的雙鏈，但互補堿基配對減少，錯配對增多、氫鍵結(jié)合的更弱。如兩個同源性在50%左右或更低些的DNA，調(diào)整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍，因此在實驗前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗，即zui適復(fù)性溫度、苛刻復(fù)性溫度及非苛刻復(fù)性溫度。溫度的選擇及溫度對雜交的影響見表18-3。

zui適復(fù)性溫度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻復(fù)性溫度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻復(fù)性溫度：Tns =Tm – (30或35℃)