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發(fā)布時(shí)間:2021-06-22 04:47  
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廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)隨著PCR反應(yīng)的積累來實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR反應(yīng)的進(jìn)程,并通過分析軟件對(duì)PCR的反應(yīng)進(jìn)行檢測分析的技術(shù)。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。
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在real-time Q-PCR技術(shù)中,無論是相對(duì)定量還是標(biāo)準(zhǔn)曲線定量方法仍存在一些PCR定量方法均有的問題有待解決。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。在標(biāo)準(zhǔn)曲線定量中,標(biāo)準(zhǔn)品的制備是一個(gè)必不可少的過程。目前由于無一統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),各個(gè)實(shí)驗(yàn)室所用的生成標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品各不相同,致使實(shí)驗(yàn)結(jié)果缺乏可比性。此外,用real-time Q-PCR來研究mRNA時(shí),受到不同RNA樣本存在不同的逆轉(zhuǎn)錄(RT)效率的限制。在相對(duì)定量中,其前提是假設(shè)內(nèi)源控制物不受實(shí)驗(yàn)條件的影響的,合理地選擇合適的不受實(shí)驗(yàn)條件影響的內(nèi)源控制物也是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠與否的關(guān)鍵。
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與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比,Real-time Q-PCR的不足之處是:(1)由于運(yùn)用了封閉的檢測,減少了擴(kuò)增后電泳的檢測步驟,因此也就不能監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的大??;(2)因?yàn)闊晒馑胤N類以及檢測光源的局限性,從而相對(duì)地限制了real-time Q-PCR的復(fù)合式(multiplex)檢測的應(yīng)用能力;(3)目前real-time Q-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高,從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。Ct值的含義是:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。
廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。
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PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。廣州勱博--屠宰場核酸提取純化一般情況下,高溫消毒時(shí),60℃就可以將多數(shù)病原殺滅,但汽i油噴燈溫度達(dá)幾百度,噴燈火焰一掃而過,也不會(huì)殺滅病原,因時(shí)間太短。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR的出現(xiàn),極大地簡化了定量檢測的過程,而且真正實(shí)現(xiàn)了絕i對(duì)定量。在不使用時(shí)蓋住接收坑,有效地控制害蟲,防止灰塵收集系統(tǒng)中的灰塵再循環(huán)回到飼料中,并管理好整個(gè)工廠的人員移動(dòng)。多種檢測系統(tǒng)的出現(xiàn),使實(shí)驗(yàn)的選擇性更強(qiáng)。自動(dòng)化操作提高了工作效率,反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應(yīng)清晰認(rèn)識(shí)到,F(xiàn)Q-PCR技術(shù)在我國各個(gè)研究領(lǐng)域的應(yīng)用并不多見,這就需要我國學(xué)者迎頭趕上,使FQ-PCR技術(shù)更充分地i推廣,以推動(dòng)研究工作的快速發(fā)展。
廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。但在PCR反應(yīng)中,由于模板、試劑、焦磷酸鹽分子的聚集等因素影響聚合酶反應(yīng),最終導(dǎo)致PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式進(jìn)行而進(jìn)入“平臺(tái)期”,而且一些反應(yīng)的終產(chǎn)物比另一些要多,因此終點(diǎn)PCR反應(yīng)方法定量并不準(zhǔn)確。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。
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一、充分認(rèn)識(shí)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)非洲排查的重要意義。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測反應(yīng)全過程。強(qiáng)化養(yǎng)殖環(huán)節(jié)非洲排查,是當(dāng)前疫情防控的關(guān)鍵措施,是及時(shí)發(fā)現(xiàn)和消除風(fēng)險(xiǎn)的重要手段,有利于非洲i疫情“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早處置”,有利于降低運(yùn)輸、屠宰、生產(chǎn)加工等下游環(huán)節(jié)疫情傳播風(fēng)險(xiǎn)。二、鼓勵(lì)規(guī)模豬場和種豬場開展非洲自檢。鼓勵(lì)規(guī)模豬場、種豬場配置檢測儀器設(shè)備,規(guī)范使用經(jīng)我部批準(zhǔn)或經(jīng)中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心比對(duì)符合要求的檢測方法,自行開展非洲檢測。
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臨床上非洲真正感i染方式往往是通過豬與豬、豬與環(huán)境等直接接觸感i染非洲,即自然感i染。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗(yàn)證、藥i效分析等。自然感i染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,非洲自然感i染情況下,唾液可以早于血液3~20天檢測出非瘟病毒,便于早期篩查!。豬群一旦出現(xiàn)不吃料、減料、輕微發(fā)熱等疑似發(fā)病癥狀,可立即采集豬的唾液、肛腸拭子等混檢,有助于疫情的提早發(fā)現(xiàn)。如果在血液中檢測到了非洲病毒,說明豬場很有可能已經(jīng)較大面積感i染非洲病毒。
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目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進(jìn)行預(yù)防,現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對(duì)非洲病毒進(jìn)行檢測,根據(jù)檢測結(jié)果,對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。農(nóng)i業(yè)部要求豬場、飼料廠和屠宰廠和流通環(huán)節(jié)必須進(jìn)行非洲病毒檢測。注意:這里說的時(shí)間,不單純是消毒所用的時(shí)間,更重要的是病原體與消毒i藥接觸的有效時(shí)間。豬場、飼料廠、屠宰廠和流通環(huán)節(jié)用我們的ASFV LAMP現(xiàn)場可視化快速檢測試劑盒對(duì)非洲病毒進(jìn)行現(xiàn)場檢測。根據(jù)檢測結(jié)果,對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。從而對(duì)非洲進(jìn)行有效的防控。i大限度減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。
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PCR檢測同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設(shè)計(jì),該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測到已知所有22種p72病毒基因型的多個(gè)毒株。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。PCR檢測雖不需要熒光顯微設(shè)備,但也需要相關(guān)設(shè)備,可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速非瘟檢測技術(shù)。