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在反相-固相萃取模式中，溶劑體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞減，而溶劑體系的洗脫強(qiáng)度應(yīng)逐漸增加。要確保所選的樣本溶劑不會洗脫目標(biāo)化合物，所選的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下，很大限度地洗脫干擾物，所選的洗脫劑應(yīng)能恰巧完全洗脫目標(biāo)化合物。

作用機(jī)理：在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間會產(chǎn)生極性作用力。普通吸附劑極性力作用在色譜中通常稱為正相色譜吸附劑。極性力比非極性力更強(qiáng)，但比離子力更弱。常用的極性基團(tuán)有羥基，胺基，巰基等。由于非極性溶劑不能與極性固定相材料形成具有氫鍵的官能團(tuán)，因此非極性基質(zhì)環(huán)境對吸附劑和目標(biāo)化合物之間的極性作用力是有利的。結(jié)果表明，在極性作用下，樣品的固相萃取過程中，基質(zhì)主要是非極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)化合物中多含有極性大的官能團(tuán)。

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含碳量

碳量是指填料的含碳量，從側(cè)面反映了C18的修飾程度，在分離效果和目標(biāo)成分保持時間方面起著重要作用。對于相同類型的填料，高碳柱上的非極性化合物比高碳柱上的碳含量高，碳鏈增大，同時也增加了結(jié)合相的非極性作用面積。C18碳含量由不同的鍵合工藝決定，市場上C18碳含量一般在17-22%之間，也有一些特殊C18碳含量超過22%，但低于14%的C18填料。大部分樣本可以用普通碳含量的C18來解決。而C18的含碳量也并非越多越好，根據(jù)樣品性質(zhì)和純化需要選擇不同含碳量的C18，例如，極性較大的化合物在高含碳量的C18中的保留程度不如低含碳量的C18。

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普通反相液相色譜柱是一種性價比極i佳的產(chǎn)品。C18反相層析柱

采用全覆蓋鍵合硅膠作填料，穩(wěn)定性好。采用的單官能團(tuán)化學(xué)鍵技術(shù)可以避免C18分子層的合成。涂覆均勻，保證了高選擇性、高i效率的固定相分離。

普通反相液相色譜柱具有優(yōu)異的穩(wěn)定性， pH適用范圍較寬(1.5~11)，峰形優(yōu)良。而且抗污染能力強(qiáng)，柱子使用壽命長。

一般情況下，反相液相色譜柱在使用緩沖液時還需注意以下事項(xiàng)：

(a)避免使用鹽酸鹽，因?yàn)樗鼤g鋼制品；

(b)緩沖液zui好是現(xiàn)配現(xiàn)用，通常緩沖液是好的菌i種培養(yǎng)液，在試驗(yàn)中隔天或放置太久都會出現(xiàn)許多異常

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固相萃取(Solid Phase Extraction，簡稱 SPE)是一種以液-固色譜分離為基礎(chǔ)的前處理技術(shù)，可對目標(biāo)化合物進(jìn)行選擇性吸附和選擇性洗脫。按保留機(jī)理，力主要分為無極力作用、極力作用、離子交換(靜電吸引)。

以可解離帶電物質(zhì)為目標(biāo)的離子交換小柱，在農(nóng)殘、獸殘的分析中，采用正、反相萃取法比較合適。今日小編就帶你詳細(xì)了解一下正、反萃取的情況。反相態(tài)是 SPE小柱中相對于流動相極性較低的分離態(tài)。本發(fā)明主要利用固定相官能團(tuán)的碳?xì)滏I和目標(biāo)化合物的碳?xì)滏I之間的非極性作用力，適合從極性基質(zhì)中提取分離非極性和中極性的目標(biāo)物。

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由于非極性溶劑不能與極性固定相材料形成具有氫鍵的官能團(tuán)，因此非極性基質(zhì)環(huán)境對吸附劑和目標(biāo)化合物之間的極性作用力是有利的。結(jié)果表明：在極性作用下，樣品的固相萃取過程中，基質(zhì)主要是正己烷、二氯甲i烷、菜油等非極性基質(zhì)，而所制備的化合物多含有極性大的官能團(tuán)。

極性固定相抽提材料包括：硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土和含有氰基(CN)、氨基(NH2)、二醇基(2 OH)的粘接硅膠。

在正相固相萃取模式中，溶劑體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞增，并隨洗脫強(qiáng)度的增加而增加。要確保所選的樣本溶劑不會洗脫目標(biāo)化合物，所選的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下，zui大限度地洗脫干擾物，這樣，洗脫劑應(yīng)恰好洗脫目標(biāo)化合物。

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有些情況下，用有i機(jī)溶劑清洗污染的柱子是不成功的，特別是當(dāng)有金屬離子吸附到硅膠或粘合劑中時：

可使用諸如0.05 M EDTA (EDTA)等鰲合劑沖洗色譜柱， EDTA可將其與許多金屬離子絡(luò)合溶解。EDTA溶液用完后，必須用足夠的水沖洗柱子。若樣品含有離子化合物，改變 pH可使其轉(zhuǎn)變?yōu)榉请x子狀態(tài)，并可通過水/有i機(jī)溶劑進(jìn)行洗脫。舉例來說，在 pH低于3時，強(qiáng)堿性雜質(zhì)可以被去除，在這種條件下，質(zhì)子銨水溶性更好。當(dāng) pH大于其 pKa時，酸性雜質(zhì)可以被洗掉——大約是pH8或9，這時，酸性雜質(zhì)是離子態(tài)。但是要注意的是，硅膠柱在長時間的高 pH環(huán)境中很容易被破壞。

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在填充壓實(shí)后， SPE小柱的填料形成柱床，當(dāng)溶劑流過小柱時，速度過快會產(chǎn)生兩個問題：一是對粘結(jié)相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而導(dǎo)致其保留活性降低；二是過快的流速會使小柱形成溝槽，使小柱沒有充分浸潤，從而減少吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標(biāo)物質(zhì)的傳質(zhì)過程，從而降低回收率。

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當(dāng) SPE小柱填料裝實(shí)后，流速過小柱時，液體是以層流通過填料層，將填料層充分浸潤，潤濕的液面截層向上推進(jìn)，見附圖；流速過大時，柱床厚度過大時，可能在填料內(nèi)形成溝道，液流將穿過溝道，快速通過小柱，而使填料浸潤不足，從而使得體與填料的接觸面積大大減小，嚴(yán)重影響填料對目標(biāo)物質(zhì)的保留性。

凈化方式的 SPE常用于吸附雜質(zhì)，富集方式常用于吸附目標(biāo)物質(zhì)， GCB是一種石墨化碳黑，是在惰性氣氛下將炭黑加熱至2700-3000℃烘焙而成，它由六個碳原子組成平面六角形，層疊而成，對于芳香平面分子易于嵌入，且吸附能力強(qiáng)，對芳香化合物具有較強(qiáng)的選擇性，對其它分析物具有較好的吸附性能，但 GCB的吸附和解吸性能會直接影響到填料的使用范圍，對 GCB的吸附能力較強(qiáng)，但對 GCB的吸附能力稍差，需要選擇適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑來釋放所吸附的物質(zhì)，因此，解析溶劑的匹配比較困難，由于其對色素等的優(yōu)異吸附性能，因此在農(nóng)殘樣品處理中，常用于吸附色素等雜質(zhì)，而不是用于吸附目標(biāo)化合物。