反相色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定，保留值通常隨鏈長增長或鍵合相的疏水性增強(qiáng)而增大．對于非極性化合物通常遵循以下規(guī)則：(弱)非鍵合硅膠《基<C1(TMS)<C3<C4<<C8≈C18(強(qiáng))。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，普通載體(80 A°)的比表面積約為250 m2/g，而300A°孔徑載體的比表面積約為60 m2/g。當(dāng)其他條件相同時，溶質(zhì)在300A°孔徑(低表面積)色譜柱上的保留值大約為80A°孔徑色譜柱上保留值的1/4(60：250)，小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨柱有利于強(qiáng)親水性樣品洗脫。樣品的保留值也可以通過改變流動相組成或溶劑強(qiáng)度來調(diào)整，溶劑強(qiáng)度取決于的性質(zhì)和其在流動相中的濃度。在反相色譜中，采用高溶劑強(qiáng)度、低極性的流動相時可獲得較低的保留值。固定相的不同也可以導(dǎo)致選擇性發(fā)生變化，基柱、柱、C8柱、C18柱等的選擇性有很大差異，一般應(yīng)優(yōu)先考慮C8柱、C18柱，然后是基柱，再次是柱。污染使得球與閥座密封不嚴(yán)，液流倒流，壓力不穩(wěn)，或球與閥座粘在一起阻死。據(jù)統(tǒng)計，近80%的有機(jī)物及無機(jī)物可以用液相色譜法進(jìn)行分離．其中反相色譜中的C18柱是液相色譜中為常用的一類色譜柱。

堵”的原因之一：純水中的細(xì)菌污染首先我們要認(rèn)識到，一般的國產(chǎn)甲1醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細(xì)菌。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。原因：墊圈與運(yùn)動著的柱塞桿緊緊接觸，是液相色譜系統(tǒng)中易磨損的部件。

有兩種方式推薦：

（1）的方式當(dāng)然是購買實驗室專用純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。缺點就是價格不菲。

（2）成箱購買市售純凈水，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機(jī)抽取一支做一下細(xì)菌平板實驗，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨(dú)開一支即可，也很方便。每次成本2元左右。這里特別指出一個細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到后一個過濾的步驟。另一種不當(dāng)就是致命的錯誤：滑絲，這往往是動手能力不太強(qiáng)，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的后果不僅是漏液那么簡單，常造成重要部件的報廢。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質(zhì)量，這一步完全可以也應(yīng)當(dāng)去除。

塞桿密封墊 現(xiàn)象：在高壓下壓力不穩(wěn)定，從泵頭滲漏流動相液體，反映在分析結(jié)果上是樣品保留時間的改變。原因：墊圈與運(yùn)動著的柱塞桿緊緊接觸，是液相色譜系統(tǒng)中易磨損的部件。緩沖液或其它含鹽的流動相更加速墊圈的磨損。墊圈磨損是不可避免的。措施：一旦墊圈損壞只有進(jìn)行更換。色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進(jìn)行老化了。更換時注意要將柱塞桿縮至后，松開泵頭的兩根收緊螺釘，操作時處處以平衡的動作進(jìn)行，切不可搖動或上下擺動泵頭，否則柱塞桿極易折斷。