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發(fā)布時間:2020-12-29 07:09  

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PCR核酸檢測技術在新冠肺yan疫情檢測中發(fā)揮了重要作用,但由于該技術將待檢測核酸多次擴增,所以非常小污染也容易導致假陽性結果。PCR實驗室建設中的污染不僅會影響實驗的質量和結果,還會危害實驗室工作人員的健康。

PCR實驗室建設完成,進行實驗過程中易發(fā)生污染產生污染主要原因:

① 這也是常見的污染原因。重復擴增后,PCR產物的黏貼遠遠超過PCR的檢測限制,所以即使是少量的污染也足以造成假陽性結果。

② 試劑的污染。在試劑的配制過程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導致試劑被污染。






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PCR實驗室裝修

1、實驗室墻壁、頂板和地板應當光滑、易清潔、防滲漏并耐化學品和消毒劑的腐蝕。地面應防滑,不得在實驗室內鋪設地毯和懸掛窗簾。實驗室的墻體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好、所有陰角采用圓弧形線條過渡;墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;墻體和吊頂建議使用彩鋼板。

2、地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

3、燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。實驗室應設應急照明裝置,同時考慮合適的安裝位置,以保證人員安全離開實驗室。

4、有可靠的電力供應和應急照明。每個房間必須裝有紫外線殺菌燈,殺菌燈的安裝高度在1.8~2.1m之間。

5、傳遞窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。




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PCR實驗的污染來源都有哪些?

樣本間交叉污染:收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴導致外溢;不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌;不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散,相互交叉污染。

實驗試劑污染:主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中,因為PCR試劑對溫度十分敏感,需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃,但這個過程也充滿污染風險。

擴增產物污染:大量拷貝的產物泄漏或擴增后的PCR反應管意外開蓋,這是PCR反應中主要、常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染,就可形成假陽性。