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發(fā)布時間:2021-01-20 14:26  

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三羥Tris是一種有機化合物,其CAS77-88-1,分子式為(HOCH2)3CNH2。作為一種常見的生物緩沖劑,三羥Tris不僅被廣泛用作核酸和蛋白質的溶劑,蛋白質電泳緩沖液的主要成分之一,還可生產(chǎn)多種化工、、產(chǎn)品,是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些的重要中間物。此外還可以用于制備復合相變材料。相變材料是指隨溫度變化而改變物質狀態(tài)并能提供潛熱的物質。當物理狀態(tài)發(fā)生變化時,材料自身的溫度在相變完成前幾乎維持不變,形成一個寬的溫度平臺,但吸收或釋放的潛熱卻相當大。




生物緩沖液Tris是一種氨基獨一不含鈉的氨基緩沖堿,不會給體系中帶入鈉、鉀離子,不影響滲透壓,必要時也可以加入生理鹽水調節(jié)鹽平衡。其對生物化學過程的影響很小,也不會與鈣、酶及重金屬離子生成沉淀,不影響激酶、磷酸酶、脫氫酶等多種酶的活性。通常用于DNA、RNA及蛋白質相關的實驗,常用緩沖體系有:Tris-HCl緩沖液、TBS緩沖液、TE緩沖液、TAE緩沖液、TBE緩沖液、Tris甘氨酸緩沖液、Tris磷酸緩沖液等。需要注意的是Tris的pH值受溫度影響較大,要注意控制好溫度;Tris溶液顯堿性,會吸收CO2,要注意密封。




   很多實驗的pH值設定在 7.4以模仿生物條件。假如你的蛋白在這個pH值下是穩(wěn)定的,那就非常棒了!如果不是,就需要改變pH值找到目的蛋白在溶液中處于可溶性且不會降解的狀態(tài)。

       一個經(jīng)驗法則是:蛋白在它等電點pI附近的pH值溶液中會表現(xiàn)得不易溶解,因為蛋白在其等電點的pH值溶液中表面沒有凈電荷,從而容易聚集。這里推薦用Expasy的ProtParam工具快速簡便地計算蛋白等電點pI值,只要提交蛋白序列即可。




10mg/ml牛蛋白(BSA):加100mg的牛蛋白(組分V或分子生物學試劑級,無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,

須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動,直至牛蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃?;蜣D移100mg的二硫蘇糖醇

至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。