低溫生物怎么保藏

保藏(culture preservation，culture collection)是指保持微生物菌株的生活力和遺傳性狀的技術。或經(jīng)人工選育得到的變異型純種，使其存活、不丟失、不污染雜菌、不發(fā)生或少發(fā)生變異，保持原有的各種特征和生理活性?；驹硎鞘刮⑸锏纳顒犹幱谛菝郀顟B(tài)，也就是使微生物的新陳代謝作用限制在低范圍內(nèi)。干燥、低溫和隔絕空氣是保證獲得這種狀態(tài)的主要措施。有針對性地創(chuàng)造干燥、低溫和隔絕空氣的外界條件，就是微生物保藏的基本技術。常用的方法有凍干保藏法、深低溫保藏法、液氮保藏法、礦油封藏法、固體曲保藏法、砂土管保藏法、瓊脂穿刺保藏法等。日常工作中，常選用4℃冰箱進行短時間的保藏

                                                       低溫生物貯存的方式

1.冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥，并在真空狀態(tài)下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。

     2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的制成菌懸液備用；其次，準備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%（體積比）甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌（1公斤/平方厘米，5分鐘）。無菌檢查后，接入要保藏的，火焰熔封瓶口，檢查是否漏氣，將封好口的安瓿瓶放在凍結器內(nèi)，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫，使保藏品逐步均勻地凍結，直至-35℃，以后凍結速度就不需控制，安瓿凍結后立即放入液氮罐內(nèi)，在-150至-196℃保藏，該法只有少數(shù)科研院所使用。

低溫生物德選育和培養(yǎng)

要看你選什么規(guī)模的發(fā)酵是小試還是中試還是生產(chǎn)？另外，你說的選育里應該是包括了培養(yǎng)基配制和擴大培養(yǎng)。所以，只能大概列一下。

選育：超低溫冰箱、無菌室、培養(yǎng)箱、搖床、分光光度計、檢測設備。

培養(yǎng)基配制：電子天平、pH計、滅菌鍋、微波爐、電磁爐、冰箱。

擴大再培養(yǎng)：滅菌鍋、搖床、抽濾瓶（或特質(zhì)金屬瓶）、空調(diào)機組、臭氧發(fā)生器。

發(fā)酵：配料罐、種子罐、發(fā)酵罐、補料罐（小試用流加泵）、有時會用到在線監(jiān)測設備如乙醇檢測儀、生物傳感器、分光光度計等、空壓機、。

分離提純：制水設備、制冷設備、濃縮機、細胞破碎儀、離心機、陶瓷膜、真空干燥設備、超低溫冷干機、造粒設備（不同產(chǎn)品用到不同的烘干設備）等，不同工藝所用設備也不同

防止低溫生物退化的措施

1.合理的育種 選育時所處理的細胞應使用單核的，避免使用多核細胞；

合理選擇誘變劑的種類和劑量或增加突變位點，以減少分離回復；在誘變處理后進行充分的后培養(yǎng)及分離純化，以保證保藏純碎。這些可有效的防止的退化。

2.選用合適的培養(yǎng)基有人發(fā)現(xiàn)用老苜蓿根汁培養(yǎng)基培養(yǎng)“5406”抗生菌—細黃鏈霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌產(chǎn)生菌—藤倉赤霉的培養(yǎng)基中，加入糖蜜、天門冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘醇等物質(zhì)時，也有防止退化的效果。也有選取營養(yǎng)相對貧乏的培養(yǎng)基做保藏培養(yǎng)基，如培養(yǎng)基中適當限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因為變異多半是通過菌株的生長繁殖而產(chǎn)生的，當培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富時，菌株會處于旺盛的生長狀態(tài)，代謝水平較高，為變異提供了良好的條件，大大提高了菌株的退化幾率。

3.創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件 在生產(chǎn)實踐中，創(chuàng)造和發(fā)現(xiàn)一個適合原種生長的條件可以防止退化，如低溫、干燥、缺氧等。在棲土曲霉3．942 的培養(yǎng)中，有人曾用改變培養(yǎng)溫度的措施(從20-30℃提高到33-34℃)來防止它產(chǎn)孢子能力的退化。

4.控制傳代次數(shù)由于微生物存在著自發(fā)突變，而突變都是在繁殖過程中發(fā)生而表現(xiàn)出來的。所以應盡量避免不必要的移種和傳代，把必要的傳代降低到很低的水平，以降低自發(fā)突發(fā)的機率。傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生突變的幾率就越高，因而發(fā)生退化的機會就越多。這要求不論在實驗室還是在生產(chǎn)實踐上，必須嚴格控制的移種傳代次數(shù)，并根據(jù)保藏方法的不同，確立恰當?shù)囊品N傳代的時間間隔。如同時采用斜面保藏和其它的保藏方式（真空凍干保藏、砂土管、液氮保藏等），以延長保藏時間。