熒光定量PCR儀的技術(shù)原理

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所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。

熒光定量PCR儀的原理

萊普特科學(xué)儀器（北京）有限公司是一家專業(yè)從事實(shí)驗(yàn)儀器生產(chǎn)、銷售和服務(wù)的企業(yè)。我們您分析該行業(yè)的以下信息。

為了便于對所檢測樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。

熒光定量PCR儀的產(chǎn)前診斷應(yīng)用

到目前為止，人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治，只能通過產(chǎn)前監(jiān)測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實(shí)時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法，易為孕婦所接受。

熒光定量PCR儀的部分應(yīng)用

新的愈后指標(biāo)的研究

對于疾病，在藥作用至一定程度后，就認(rèn)為可以停藥了，但是應(yīng)該在什么停藥，現(xiàn)在大都沒有一個明確的指標(biāo)，現(xiàn)在所用的指標(biāo)由于受到檢測方法的靈敏度及準(zhǔn)確性限制，這一指標(biāo)未必合理，因此有必要對治好的指標(biāo)以及指標(biāo)與發(fā)率以及疾病轉(zhuǎn)化為其他疾病之間的關(guān)系等進(jìn)行進(jìn)一步的研究，從而為藥或療法徹底治好疾病打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。