大腸菌群檢驗(yàn)方法

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法，即：乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)?！　∪樘前l(fā)酵試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀(guān)察是否產(chǎn)氣。

　　分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀(guān)察菌落形態(tài)。

　　證實(shí)試驗(yàn)：挑取平板上的ke疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀(guān)察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h，觀(guān)察產(chǎn)氣情況。

　　報(bào)告：根據(jù)證實(shí)為大腸桿菌陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN表，報(bào)告每100ml（g）大腸菌群的MPN值。

常見(jiàn)的水中糞大腸菌群檢測(cè)方法如下：

1、多管發(fā)酵法

通過(guò)將污染水樣接種入多根試管中進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，利用大腸菌群繁殖時(shí)使乳糖發(fā)酵，并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃，同時(shí)產(chǎn)生氣泡的特有現(xiàn)象，根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所表現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查的相應(yīng)的MPN指數(shù)，計(jì)算每升水中糞大腸菌群的zui近似值。

2、濾膜法

將水樣注入已滅菌的放有孔徑為0.45μm濾膜的濾器中，經(jīng)過(guò)抽濾，將細(xì)菌截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上，經(jīng)44.5℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色的菌落，計(jì)算出每升水的糞大腸菌數(shù)。

定量封口機(jī)廠(chǎng)家介紹酶底物法檢測(cè)使用方法。

配件以及技術(shù)方案：

針對(duì)酶底物法檢測(cè)的原理采購(gòu)相應(yīng)的設(shè)備。用途如下：

程控定量封口機(jī)：用于定量檢測(cè)盤(pán)的封口。

酶底物檢測(cè)試劑：用于選擇性檢測(cè)水中的目標(biāo)細(xì)菌。

51或97定量檢測(cè)盤(pán)：用于判斷目標(biāo)微生物數(shù)量。

100毫升定量瓶/取樣瓶：專(zhuān)業(yè)的為水樣與試劑提供溶解環(huán)境。

紫外手持式紫外分析儀帶暗室：測(cè)定大腸埃希氏菌時(shí)用于在暗室中觀(guān)察熒光。

操作方法：

一步：將水樣加入100ml取樣瓶中，加入酶底物法檢測(cè)試劑，擰緊蓋子搖勻至完全溶解。

第二步：將樣品加到定量檢測(cè)盤(pán)中。

第三步：使用程控定量封口機(jī)對(duì)定量檢測(cè)盤(pán)進(jìn)行樣品分配及封口。

第四步：糞大腸菌群的測(cè)定則將培養(yǎng)箱設(shè)定為44.5℃，培養(yǎng)24h。

第五步：對(duì)照比色盤(pán)數(shù)陽(yáng)性（顯黃色，或熒光）格子數(shù)，按照使用的檢測(cè)盤(pán)類(lèi)型，分別查51孔或者97孔MPN表得出100毫升中大腸菌群的菌群數(shù)。對(duì)照MPN表出數(shù)據(jù)。

第六步：根據(jù)稀釋倍數(shù)結(jié)果按公式計(jì)算結(jié)果。

大腸菌群（個(gè)/L）=MPN值×稀釋倍數(shù)×1000mL/100mL。