等溫核酸試劑盒

TwisAmp Liquid Exo說明

以靈活的液體形態(tài)進行實時熒光 RNA 擴增。若想要將 RPA 與 TwistDx 熒光 TwistAmp? exo 探針結(jié)合使用，則推薦使用本產(chǎn)品。除了基本的組分，還包含強大的核酸酶（核酸外切酶 III），該酶將在擴增反應(yīng)期間處理 TwistAmp? exo 探針并產(chǎn)生實時讀出。用戶只需提供引物、探針、dNTP 和模板。

非常適用于：實時熒光 DNA 檢測，便于使用不同的 RPA 反應(yīng)體積或改變組分比例

Product code: TALQEXO01

核酸試劑盒

LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法的特征是針對目標(biāo)DNA鏈上的六個區(qū)段設(shè)計四個不同的引物然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下(60~65℃)、經(jīng)一個步驟即可完成。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動 DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。RPA擴增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴增結(jié)果可以通過凝膠電泳進行終點檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應(yīng)終點的擴增子總量有所減少，適合獲得強熒光信號進行動力學(xué)分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實現(xiàn)RNA模板的實時擴增。