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發(fā)布時間:2021-07-04 12:06  
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實(shí)驗(yàn)原理
高架十字迷宮(the elevated plus maze,EPM)是評價嚙齒類動物焦躁反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法 , 相較傷害性刺激所致小鼠焦躁行為檢測(如電刺激 、 噪聲刺激 、 飲食剝奪和暴露在捕食者氣味等), 該實(shí)驗(yàn)具有操作簡單的優(yōu)點(diǎn) , 能直觀反映小鼠的條件應(yīng)答 。 EPM實(shí)驗(yàn)是在高架Y型迷宮的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的 。 EPM由開臂(open arms和閉臂(closed arms)各兩條組成 , 呈十字形交叉 , 交義部分為中央?yún)^(qū) , 距地面有一定高度 。其原理是由于面對新事物開臂 小鼠會產(chǎn)生好奇心去探究 , 而它們有嗜暗的天性(閉臂), 兩者之間發(fā)生探究與回避的沖突行為,產(chǎn)生焦躁心理。整個迷宮距離地面的高度相當(dāng)于人類站在懸崖邊,易導(dǎo)致動物產(chǎn)生恐懼不安的心理??梢酝ㄟ^對比小鼠在開臂和閉臂內(nèi)的滯留時間和路程來評價小鼠的焦躁行為。
EPM實(shí)驗(yàn)在藥品開發(fā)和研究中得到廣泛的應(yīng)用:主要用于苯二氮卓類藥品的抗焦躁作用研究 及篩選具有抗焦l慮作用的新藥,也被用于研究精神性藥品濫用的影響及激s素的功能,應(yīng)激對生殖、衰老、妊s娠的影響等??菇筶慮藥主要選擇性地抑制邊緣系統(tǒng) 的海馬、杏仁核 ,產(chǎn)生抗焦躁作用。
實(shí)驗(yàn)步驟
1、實(shí)驗(yàn)之前,一定要確保高架十字迷宮整個裝置的清潔。這個步驟不僅僅是要求當(dāng)天的實(shí)驗(yàn),更加側(cè)重于每一次動物實(shí)驗(yàn)完成后的清潔除味工作,一定要去除上一只動物在宮體內(nèi)遺留下來的尿液、糞便等,盡可能創(chuàng)造一個清潔、無味道的理想試驗(yàn)環(huán)境。同時,實(shí)驗(yàn)員需要記錄動物的編號、日期、狀態(tài)等信息;實(shí)驗(yàn)動物提前運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室臨時籠架 ,
適應(yīng)環(huán)境至少3H左右, 減少動物緊張。
2、將實(shí)驗(yàn)動物(大鼠或者小鼠)從飼養(yǎng)籠中取出,實(shí)驗(yàn)動物盡量背向?qū)嶒?yàn)員,將動物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域,動物面向開臂,然后實(shí)驗(yàn)員迅速安靜的離開;
3、打開SuperMaze或者VisuTrack動物行為分析軟件,跟蹤動物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運(yùn)動,自動計算指標(biāo),通常實(shí)驗(yàn)時長為5min;
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取出實(shí)驗(yàn)動物,放入飼養(yǎng)籠,做好實(shí)驗(yàn)完成動物的標(biāo)記信息,同時,用酒精和紙巾清潔迷宮。
高架十字迷宮試驗(yàn) :
EPM ) 既可以建立焦躁應(yīng)激的模型也是國際上公認(rèn)的經(jīng)典測量焦躁反應(yīng)的方法。其原理是利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐 懼心理, 形成動物的矛盾沖突來考察大鼠的焦躁狀態(tài)。 EPM 測試的項(xiàng)目中, 焦躁動物的 OE% 和 OT% 會明顯降低, 經(jīng)典抗焦躁藥則使兩者升高, OE CE 反映了動物的運(yùn)動活性。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠的 OE% 和 OT% 顯著下降, 運(yùn)動活性也降低。HD反映了動物在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為, 代表動物對陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避, 與焦躁程度有一定相關(guān)性, 本研究中空瓶應(yīng)激后的大鼠 HD行為減少; RR可用來觀察藥有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強(qiáng)度。上述結(jié)果證實(shí), 慢性應(yīng)激后的大鼠明顯處于焦躁狀態(tài), 說明慢性焦躁應(yīng)激大鼠模型的制備成功, 且通過量化的標(biāo)準(zhǔn)客觀反映出大鼠的焦l慮程度。

在各種致病因素作用下,大腦實(shí)質(zhì)受到損傷后可出現(xiàn)神經(jīng)功能改變,如偏癱、平衡失調(diào)等。
對于神經(jīng)系統(tǒng)疾病動物模型而言,造模結(jié)束只是步,驗(yàn)證個體模型是否成功是第二步,而控制組內(nèi)個體特征一致性是第三步。
采用神經(jīng)功能評分是重要的觀察指標(biāo),可以用來在體評價模型是否成功或者病變嚴(yán)重程度。盡量控制動物模型的評分一致性是很困難但不得不做的一件事。
這里介紹三種常見的嚙齒類神經(jīng)功能評分方法。
一、【Longa評分法】
① 無神經(jīng)功能缺陷:0分;
②癱瘓側(cè)前爪不能完全伸展:1分;
③行走時向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈:2分;
④行走時向癱瘓側(cè)傾倒:3分;
⑤不能自動行走,存在意識喪失現(xiàn)象:4分。
二、【Bederson評分法】
抓起動物的尾巴,使動物離臺面10cm高。此時,正常大鼠的前爪處于伸直狀態(tài),而存在神經(jīng)功能病變的動物則可出現(xiàn)如下表現(xiàn):
②動物尾巴提起后,癱瘓側(cè)前肢回收并屈于腹下,而正常側(cè)肢體伸向臺面:1分;
③除第二條表現(xiàn)以外,俯臥于臺面時向癱瘓側(cè)側(cè)推動物的阻力較正常側(cè)明顯降低:2分;
④除條和第二條以外,動物行走時向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn):3分。
三、【平衡木評分法】
一根長為80cm、寬為2.5cm的木條,水平固定在離臺面10cm高度的地方,然后讓動物在木條上行走。
①能跳上平衡木條,可以自由行走但不跌倒:0分;
②能跳上平衡木條,動物在上面行走會跌下,但跌下的機(jī)會小于50%:1分;
③能跳上平衡木條,動物在上面行走會跌下,但跌下的機(jī)會大于50%:2分;
④動物在正常側(cè)身體的幫助下可以跳上平衡木條;但是癱瘓側(cè)的后肢不能夠幫助身體向前移動:3分;
⑤動物無法在平衡木條上行走,但是可以坐在木條上:4分;
⑥將動物放在木條上,動物很快會掉落下來:5分。