ELISA試劑盒——會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。

b.原因：操作時(shí)間拖太久。

解決辦法：請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。

c.原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時(shí)，請(qǐng)小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。

解決辦法：請(qǐng)使用已校正過(guò)的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時(shí)，吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。

f.原因：洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。

解決辦法：請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板過(guò)程，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無(wú)法降低室內(nèi)溫度，請(qǐng)適當(dāng)縮短步驟4的溫育時(shí)間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍(lán)色，請(qǐng)不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時(shí)間超過(guò)太久。

解決辦法：請(qǐng)控制反應(yīng)時(shí)間。

d.原因：酶標(biāo)記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過(guò)的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標(biāo)記物與底物溶液)接觸過(guò)的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無(wú)殘留)

Elisa試劑盒有哪些需要注意的？

1. 跟著病況的進(jìn)展或由其他因素影響，某些在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。

2. 加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時(shí)則不需更換吸嘴。

3.在成批手藝檢測(cè)中，還應(yīng)留神操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原反響和酶促反響時(shí)間不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不留神可能會(huì)導(dǎo)致過(guò)錯(cuò)效果或定量不準(zhǔn)。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1  錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品  加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

2  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤  按照說(shuō)明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

3  標(biāo)準(zhǔn)品污染  使用一次性的滅菌吸頭， 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃

4  錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟  按照說(shuō)明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

5  波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm。雙波長(zhǎng)比色分析優(yōu)于單波長(zhǎng)。

6  標(biāo)準(zhǔn)品混用  不同批號(hào)試劑勿混用

7  試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失活  盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

8  ELISA未終止而直接檢測(cè)450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測(cè)，否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）