Arl3（類似Arf的3）是一種ADP-核糖基化因子（Arf）家族蛋白，在N端延伸方面不同于大多數(shù)Arf家族成員。 Arl3的核苷酸交換是快速的，并且與脂質(zhì)和去污劑無關(guān)。 與GDT / GTP結(jié)合后，Arl3與一系列效應蛋白相互作用，并調(diào)節(jié)這些效應蛋白的活性，例如人類視網(wǎng)l膜基因4（HRG4），cGMP磷酸二酯酶的δ亞基（PDEδ）和Arl2的結(jié)合物（BART）。 Arl3還以可調(diào)節(jié)的方式結(jié)合微管，以通過與色素性視網(wǎng)l膜炎2（RP2）相互作用來改變胞質(zhì)分裂的特定方面。 有人提出，RP2與Arl3協(xié)同作用，將光感受器中的細胞膜和細胞骨架連接為細胞的一部分

9.收集上清液并在冰上存儲樣品（約1-2 mg總蛋白）以進行中間使用，或?qū)⑵淅鋬霾⒈４嬖?70°C下以備將來使用。

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學試劑供應商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域，主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等，與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長期穩(wěn)定的合作關(guān)系，產(chǎn)品銷往全球。武漢紐斯特生物將攜手美國NewEastBio，負責美國品牌NewEastBio產(chǎn)品在中國市場的推廣、銷售及售后服務(wù)。

測定原理

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒基于特定于配置的抗Rab35 GTP

單克l隆抗l體，用于測量細胞提取物中或體外的活性Rab35 GTP水平

GTPγS加載Rab35激l活測定。 簡而言之，抗活性Rab35小鼠單克l隆抗l體將是

與含有Rab35-GTP的細胞裂解液一起孵育。 綁定的活動Rab35隨后將被下拉

蛋白質(zhì)A / G瓊脂糖。 沉淀的活性Rab35將通過免l疫印跡分析使用

抗Rab35兔多克l隆抗l體。

目前還沒有直接測定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活檢測試劑盒是基于特定構(gòu)型的單克l隆抗l體特異性識別Arl1 GTP，但不識別Arl1 GDP的抗l體。鑒于克l隆抗l體對其抗原，活化試驗可在短時間內(nèi)進行。這個分析結(jié)果可靠，重現(xiàn)性一致。

分析原理

NewEast Biosciences Arl1激l活檢測試劑盒基于配置特異性抗Arl1-GTP從細胞提取物或體外檢測活性Arl1-GTP水平的單克l隆抗l體GTPγS負載Arl1活化分析。簡而言之，抗活性Arl1小鼠單克l隆抗l體將用含有Arl1-GTP的細胞裂解液培養(yǎng)。然后，綁定的活動Arl1將被下拉蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖。用抗Arl1兔多克l隆抗l體或抗Arl1小鼠單克l隆抗l體進行免l疫印跡分析，檢測沉淀的活性Arl1。

需要但未提供的材料

1刺激性和非刺激性細胞裂解物

2蛋白酶抑制素

4°C搖管器或振動篩

40.5 M EDTA，pH8.0

51百萬氯化鎂

62X還原SDS-PAGE樣品緩沖液

7電泳和免l疫印跡系統(tǒng)

8免l疫印跡洗滌緩沖液，如TBST（10 mM Tris HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05%

吐溫-20）

9免l疫印跡阻斷緩沖液（含5%脫脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的TBST）

10PVDF或硝化纖維膜

11次級抗l體

12ECL檢測試劑