免yi共沉淀（Co-IP檢測）是以抗ti和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的方法。當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用也被保留下來。不過該文庫構(gòu)建時(shí)會(huì)進(jìn)行片段化選擇從而濾掉了smallRNA的信息，所以需要另外再構(gòu)建一個(gè)smallRNA文庫，進(jìn)行測序分析后可以得到miRNA和其他smallRNA的鑒定及注釋信息。用預(yù)先固化在beads上的蛋白質(zhì)A的抗ti免yi沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來，再通過蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。

慢病毒包裝

1、細(xì)胞準(zhǔn)備：細(xì)胞傳到后，密度達(dá)到70％左右時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染；

2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染:取兩個(gè)EP管，一個(gè)加入Opti-MEM、核心質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒；另一個(gè)加入Opti-MEM、lipo2000，然后將兩管混勻；

3、細(xì)胞孵育：將混合液逐滴加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，混勻后孵育；

4、收集病毒：轉(zhuǎn)染后48h、72h收集含慢病毒的上清；

5、滴度檢測:細(xì)胞為30%－50％時(shí)加入病毒上清液，檢測陽性細(xì)胞比例。

動(dòng)物組織細(xì)胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

分子生物學(xué)檢測服務(wù)

隨著生命科學(xué)和化學(xué)的不斷發(fā)展，人們對(duì)生物體的認(rèn)知已經(jīng)逐漸深入到微觀水平。從單個(gè)的生物體到qi官到組織到細(xì)胞，再從細(xì)胞結(jié)構(gòu)到核酸和蛋白的分子水平，人們意識(shí)到可以通過檢測分子水平的線性結(jié)構(gòu)（如核酸序列），來橫向比較不同物種，同物種不同個(gè)體，同個(gè)體不同細(xì)胞或不同生理（病理）狀態(tài)的差異。這就為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域提供了技術(shù)平臺(tái)。分子生物學(xué)檢測技術(shù)是現(xiàn)代分子生物學(xué)與分子遺傳學(xué)取得進(jìn)步的結(jié)晶，是在人們對(duì)基因的結(jié)構(gòu)以及基因的表達(dá)和調(diào)控等生命本質(zhì)問題的認(rèn)識(shí)日益加深的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的。于是,我們把位于染色體上某一區(qū)域的一組相關(guān)聯(lián)的SNP等位位點(diǎn)稱作單體型(haplotypeb大多數(shù)染色體區(qū)域只有少數(shù)幾個(gè)常見的單體型(每個(gè)具有至少5%的頻率),它們代表了一個(gè)群體中人與人之間的大部分多態(tài)性。近年來，分子生物學(xué)檢測技術(shù)的方法學(xué)研究取得了進(jìn)展，先后建立了各種分子生物學(xué)檢測技術(shù)。