廣州碩譜生物科技有限公司塑料樣品瓶2ml

固相萃取操作中常見的問題

回收率低在一次完整的SPE操作中，目標(biāo)化合物可能會(huì)存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物沒有回收或回收率低” 現(xiàn)象發(fā)生時(shí)，可向樣品溶液加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。

首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，進(jìn)而確定問題來自下列哪一環(huán)節(jié)：目標(biāo)化合物在吸附劑上保留不足；目標(biāo)化合物未被完全洗脫；其他環(huán)節(jié)。

由于許多化合物同時(shí)具有多種官能團(tuán)，在選擇固相萃取機(jī)理時(shí)，應(yīng)該根據(jù)目標(biāo)化合物及干擾物的性質(zhì)來考慮采用哪種萃取機(jī)理較為有利。如：2-萘胺是一個(gè)弱堿性化合物（pKa=4.16），在一定的pH條件下還可以呈陽離子狀態(tài)，同時(shí)該化合物具有疏水的非極性官能團(tuán)及親水的極性官能團(tuán)。這時(shí)，就應(yīng)該根據(jù)樣品基質(zhì)的具體情況來選擇有利于將目標(biāo)化合物與干擾物分離的萃取機(jī)理。SPE柱的類型SPE柱的凈化原理是根據(jù)待測(cè)化合物和雜質(zhì)在柱中填料的保留能力差異，起到分離的作用，這也是色譜的重要原理之一。如果樣品基質(zhì)中同時(shí)含有大量的非極性干擾雜質(zhì)，就應(yīng)該避免采用非極性的萃取機(jī)理，而將樣品的pH調(diào)節(jié)到低于其pKa兩個(gè)pH單位，即pH=2.16，并采用陽離子交換機(jī)理。反之，如果樣品中同時(shí)含有大量的陽離子干擾雜質(zhì)，則應(yīng)該調(diào)節(jié)樣品的pH至6.16（高于pKa兩個(gè)單位），采用非極性萃取機(jī)理較為有利。

固相萃取柱廣泛應(yīng)用于食品、農(nóng)產(chǎn)品、環(huán)境、生物產(chǎn)品樣品的前處理，主要起到凈化、分離、濃縮作用。內(nèi)部的篩板和填料是關(guān)鍵，外形類似注射1器。相信每個(gè)人都會(huì)疑惑，為什么我的實(shí)驗(yàn)回收率不高？固相萃取包括(含有某些官能團(tuán)的固體吸附劑)和液相(樣品和溶劑)。明明前處理并不麻煩，只是過一小柱啊，為什么回收率會(huì)低呢？那么問題來了，是不是應(yīng)該用固相萃取柱呢？包裝、規(guī)格、型號(hào)是否受到關(guān)注？

簡單明了地介紹一下，什么是固相小柱。

固相萃取小柱是一種用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。大多數(shù)用來處理液體樣品。萃取、濃縮和凈化其中的半揮發(fā)性和不揮發(fā)性化合物；也可用于固體樣品，但必須先把固體樣品處理成液體。

對(duì)于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測(cè)定分子量比較高的多肽，尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長。第五，也是zui重要的一點(diǎn)，用完一次后，多次洗脫和淋洗，用多了好多的溶劑，而且更關(guān)鍵的是太費(fèi)時(shí)間了，幾個(gè)樣品需要弄好久。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。

反相模式是指SPE小柱固定相極性小于流動(dòng)相極性的分離模式。主要是利用固定相官能團(tuán)的碳?xì)滏I與目標(biāo)化合物的碳?xì)滏I之間的非極性作用力，適用于從極性基質(zhì)中萃取分離非極性到中等極性的目標(biāo)物。

對(duì)于通過非極性作用力吸附在反相SPE柱上的目標(biāo)物，可以用弱極性的溶劑洗脫，如氯i仿、環(huán)己i烷、乙i酸乙i酯等。

在用到 SPE 前處理的時(shí)候，各位分析檢測(cè)工程師碰到zui煩人zui令人抓狂的問題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況；過小柱過到令人崩潰，既然流速都保證不了，怎么敢奢求回收率。

沒關(guān)系，碩譜憑借多年來在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累，教您幾招，治liao小柱“便i秘”的難題。SPE 的基本操作，包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫，五個(gè)步驟。問題無外乎出現(xiàn)在這幾個(gè)步驟里面，別急，我們一個(gè)個(gè)過來看。

活化平衡一般反相或者離子交換類型的小柱分別用到甲i醇和水進(jìn)行活化和平衡，正相小柱會(huì)用到石i油醚或者正己烷來活化平衡。

1) 填料裝填過緊導(dǎo)致流速過慢。 可以通過加壓加快流速，或者購買對(duì)流速有嚴(yán)格質(zhì)控廠家的產(chǎn)品解決，對(duì) CNW 小柱每個(gè)批次的流速都有嚴(yán)格的質(zhì)控范圍，質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì)被剔除。

2) 填料粒徑過小導(dǎo)致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下，100-200 目的 florisil 就會(huì)比60-100 目的更慢些。 可以根據(jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適規(guī)格的小柱。