分子生物學(xué)服務(wù)

 公司建有100平米分子實驗室，配備有PCR儀、定量PCR儀、電泳儀、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫?fù)u床、垂直電泳儀、蛋白轉(zhuǎn)印儀、蛋白發(fā)光成像儀等設(shè)備。技術(shù)優(yōu)勢信息覆蓋廣泛：覆蓋了多個quan威lncRNA數(shù)據(jù)庫發(fā)布的數(shù)據(jù)。分子組技術(shù)人員畢業(yè)于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院、浙江理工大學(xué)等高校生物醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)，全部具有碩士研究生以上學(xué)歷，熟練掌握分子生物學(xué)相關(guān)實驗，可開展多種分子生物學(xué)檢測服務(wù)。

分子實驗介紹——熒光定量PCR檢測

熒光定量PCR是檢測生物樣品中RNA含量的普遍的方法，通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。但是長期以來，大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)分析譜并沒有提升我們對生物標(biāo)志物的認(rèn)識，其主要原因是差異蛋白的分析結(jié)果缺乏規(guī)?；尿炞C。目前主要使用Sybr green和taqman法對RNA含量進(jìn)行檢測。Sybr green在低樣本量時成本較低，目前選用的較多。

SYBR Green I是一種只與DNA雙鏈結(jié)合的熒光染料。分子組技術(shù)人員畢業(yè)于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院、浙江理工大學(xué)等高校生物醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)，全部具有碩士研究生以上學(xué)歷，熟練掌握分子生物學(xué)相關(guān)實驗，可開展多種分子生物學(xué)檢測服務(wù)。當(dāng)它與DNA雙鏈結(jié)合時，發(fā)出熒光；從DNA雙鏈上釋放出來時，熒光信號急劇減弱。因此，在一個體系內(nèi)，其信號強(qiáng)度代表了雙鏈DNA分子的數(shù)量。SYBR Green熒光染料法定量PCR的基本過程是：1、開始反應(yīng)，當(dāng)SYBR Green染料與DNA雙鏈結(jié)合時發(fā)出熒光。2、DNA變性時，SYBR Green染料釋放出來，熒光急劇減少。3、在聚合延伸過程中，引物退火并形成PCR產(chǎn)物。4、聚合完成后，SYBR Green染料與雙鏈產(chǎn)物結(jié)合，定量PCR系統(tǒng)檢測到熒光的凈增量加大。

實驗流程：細(xì)胞或組織RNA提取-RNA濃度檢測-RNA逆轉(zhuǎn)錄-定量PCR檢測。

結(jié)果示例：

圖 A 基因擴(kuò)增曲線圖；B 基因擴(kuò)增溶解曲線圖；C mRNA相對表達(dá)量變化

從圖中可以擴(kuò)增曲線可以看出目的RNA擴(kuò)增效果，溶解曲線可以看出引物識別特異性情況，通過使用ΔΔCt方法計算可以得到每個組中目的mRNA表達(dá)變化。

腺病毒包裝原理介紹

腺病毒是一種沒有包膜的直徑為79-90nm的顆粒，由252個 殼粒呈二十面體排列構(gòu)成。若miRNA與mRNA的結(jié)合位點不配對，則抑制mRNA的翻譯。每個殼粒的直徑為7-9nm。衣殼里是線狀雙鏈DNA分子，兩端各有長約100bp的反向重復(fù)序列。人體腺病毒 已知有33種，分別命名為ad1-ad33，研究詳細(xì)得是ad2.

腺病毒是一種無包膜的球型結(jié)構(gòu)的病毒，遺傳物質(zhì)為線型 雙股DNA形式。目前國內(nèi)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標(biāo)準(zhǔn)和原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。腺病毒的特點：（1）gan染范圍廣對人致病性低；（2）對增殖和非增殖細(xì)胞均具有g(shù)an染性；（3）能有效進(jìn)行增殖；（ 4）病毒滴度高；（5）不整合到染色體中，無插入致突變性；(6)外源基因裝載容量大。由于腺病毒的這些特點使其廣泛地應(yīng)用于體 外基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、體內(nèi)接種yi苗、和基因zhi療等各個領(lǐng)域。

實驗方法

1.獲得目的基因序列；

2.構(gòu)建病毒表達(dá)載體質(zhì)粒；

3.表達(dá)載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組；

4.gan染HEK293，包裝出病毒；

5.病毒擴(kuò)增、濃縮；

6.滴度測定。

轉(zhuǎn)錄組重測序      

      轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有mRNA的總和。STR是以核心序列(corerepeatunits)首尾相連多次重復(fù)形成。轉(zhuǎn)錄組研究是基因功能及基因結(jié)構(gòu)等研究的基礎(chǔ)，通過新一代高通量測序，能夠快速的獲得某一物種特定組織或在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本序列信息，已廣泛應(yīng)用于臨床診斷、基礎(chǔ)研究和研發(fā)等領(lǐng)域。

     轉(zhuǎn)錄組Resequencing針對的是有參考基因組的物種。用新一代高通量測序技術(shù)對某物種的特定組織或細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，與參考基因組比較，可以得到基因表達(dá)差異、可變剪接、融合基因等遺傳調(diào)控信息。