小分子類(lèi)物質(zhì)包含多肽、天然小分子、化學(xué)合成小分子等一系列的物質(zhì)，被廣泛用于medicine等各個(gè)領(lǐng)域。以往小分子的定量檢測(cè)主要通過(guò)氣相和液相色譜完成，存在周期長(zhǎng)，檢測(cè)儀器價(jià)格昂貴等多方面的不足。那么immune檢測(cè)技術(shù)可以用于定量檢測(cè)小分子嗎？

免1疫檢測(cè)試劑盒的技術(shù)基礎(chǔ)就是抗原和抗1體的特異性結(jié)合，小分子特異性抗1體的制備即是小分子immune檢測(cè)試劑盒制備的關(guān)鍵之處。小分子由于分子量小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，在免1疫學(xué)上劃歸為半抗原（Hapten），即只有immune反應(yīng)性而沒(méi)有immune原性的一類(lèi)物質(zhì)，不能直接刺激機(jī)體產(chǎn)生antibody但是卻擁有和antibody結(jié)合的特性。隨著抗1體制備技術(shù)的發(fā)展，小分子特異性抗1體的制備技術(shù)顯得更為多元化

在選用支原體PCR法檢測(cè)來(lái)替代藥典方法時(shí)，需要考慮如下兩個(gè)方面：

首先一步是要使用符合歐洲藥典要求，經(jīng)過(guò)全方面驗(yàn)證的支原體檢測(cè)試劑盒，第二部是自我驗(yàn)證，即確認(rèn)所用的樣本基質(zhì)對(duì)于該試劑盒方法是合適的，并且操作過(guò)程是正確的。小規(guī)模的室內(nèi)驗(yàn)證通常需要采用三個(gè)不同批次的試劑盒，然后加入10CFU的標(biāo)準(zhǔn)品，做復(fù)孔（通常是8個(gè)復(fù)孔），并且至少選擇3個(gè)支原體物種進(jìn)行驗(yàn)證。

有的支原體標(biāo)準(zhǔn)品廠家會(huì)提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值，以方便二者的換算。因?yàn)?0CFU只能確定PCR能夠達(dá)到的檢測(cè)限在10CFU以下，但無(wú)法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進(jìn)一步確定檢測(cè)限的數(shù)值。

總之，PCR方法很有用，但需要避免假陰性，驗(yàn)證時(shí)應(yīng)使用陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、無(wú)模板對(duì)照和內(nèi)控對(duì)照，以保證PCR反應(yīng)正常，以及支原體少量存在時(shí)確實(shí)能檢出來(lái)，支原體不存在時(shí)也確保是結(jié)果陰性，從而使得PCR方法在工業(yè)應(yīng)用時(shí)能確保zui終結(jié)果的可靠。

棉花等酚類(lèi)、多糖類(lèi)物質(zhì)較多的植物ＤＮＡ提取法：

1 取2ｇ新鮮幼嫩的葉片放入研缽中,加入液氮后快速、充分研磨,待成極細(xì)的粉末狀時(shí)迅速轉(zhuǎn)入到50ｍｌ離心管中。

2 在50ｍｌ離心管中加入10ｍｌ冰預(yù)冷的提取緩沖液,在渦懸振蕩器上充分混勻。

3 于4℃,2700×ｇ離心20分鐘,倒去上清液。

4 在沉淀中加入5ｍｌ裂解緩沖液,在渦旋振蕩器上充分混勻。

5 于65℃水浴鍋中溫育30ｍｉｎ。

6 加入5ｍｌ氯1仿/異戊1醇(24/1),并上下翻轉(zhuǎn)以充分混合。

7 于4℃,2700×ｇ離心5分鐘。

8 轉(zhuǎn)移上層水相至一新的50ｍｌ離心管中。

9 重復(fù)步驟7-9一次。

10 加入2/3體積的冰預(yù)冷的異丙1醇,并上下翻轉(zhuǎn)以充分混合,至-20℃2ｈ。

11 于4℃,1200×ｇ離心10ｍｉｎ。

12 在一新管中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液,用玻棒將ＤＮＡ轉(zhuǎn)入該管(如不能直接用玻棒纏出,可離心后倒出上清,再在其中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液),放置20ｍｉｎ后稍許離心,移走上清并吸出殘存乙醇,室溫干燥。

13 加入1 0ｍｌＴＥ(10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌＰＨ=8 0,1ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ)并加入終濃度為20(ｇ/Ｌ的ＲＮａｓｅＡ,過(guò)夜。

14 風(fēng)干,用50μｌＴＥ緩沖液溶解,存于-20℃?zhèn)溆谩?br />