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發(fā)布時(shí)間:2021-06-23 08:23  
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ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心檢測技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。
制備方法編輯包括以下步驟:1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選;2)抗原的制備;3)的采集;4)間接ELISA方法的建立;5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;7)對屠宰場進(jìn)行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出豬的戊型病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測,可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊毒的流行和阻斷戊毒由豬向人傳播。
終止液(3M H2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入(98%)21.7ml。(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml加蒸餾水50ml。(6) TMB(四)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5) 10ml0.75%H2O2 32μl(7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg底物緩沖液(PH5.5) 1ml3%H2O2 2μl(8) 抗原、和酶標(biāo)記。(9) 正常人和陽性對照。
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