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博日食品廠熒光定量PCR咨詢客服「勱博儀器」

發(fā)布時間:2021-05-01 11:28  

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據(jù)介紹,該發(fā)明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測試劑及其制備方法與用途,設(shè)計合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽性對照,并利用該引物及探針建立了一種快速簡便、特異性強、靈敏度高的熒光 PCR 檢測體系,可在 3~4 小時內(nèi)從被檢樣本中快速、準(zhǔn)確、特異、安全、簡便地檢出 ASFV CP530R 基因,可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測。生產(chǎn)上常見到的則是不經(jīng)計算,只是在消毒i藥將舍內(nèi)全部噴濕即可,人走后地面馬上干燥,這樣的消毒效果是很差的,因為消毒i藥無法與掩蓋在深層的病原接觸。

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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。從 20 世紀(jì) 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開始在我國快速蔓延開來,對我國養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。因此,本方法為快速診斷非洲病毒,提供了有力的技術(shù)手段。



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根據(jù)動物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫(yī)實施屠宰檢疫。PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。按照生豬屠宰檢疫規(guī)程和相關(guān)規(guī)定,屠宰檢疫內(nèi)容包括傳i染病和寄i生蟲病,檢疫流程包括生豬進入屠宰廠(場、點)監(jiān)督查驗、檢疫申報、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結(jié)果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫(yī)監(jiān)督屠宰企業(yè)開展非洲自檢,對沒有開展自檢的屠宰企業(yè),對屠宰后的生豬產(chǎn)品一律不得出具動物檢疫證明。

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實時熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過擴增曲線對未知模板進行定量分析的方法。環(huán)境監(jiān)測在人類食品和寵物食品行業(yè)已經(jīng)成為常規(guī)舉措,可以幫助人們發(fā)現(xiàn)生物安全計劃中的薄弱環(huán)節(jié)。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗證、藥i效分析等。金開瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針法進行熒光定量PCR檢測,從引物設(shè)計到檢測一次性完成,提供2種常用的內(nèi)參引物及免費的專業(yè)數(shù)據(jù)分析,每個樣品設(shè)置至少三個平行對照,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。


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非洲(African Swine fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine fever virus,ASFV)感i染家豬和各種(非洲、歐洲等)引起一種急性、出i血性、烈性傳i染病。因為每一個梯度要做三個重復(fù),因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我范的一類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短,急性和急性i感i染死i亡率高達,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴i結(jié)、、胃腸粘膜明顯出血,非洲臨床癥狀與癥狀相似,只能依靠實驗室監(jiān)測確診。

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非洲是一種傳i染性強,危害嚴(yán)重的豬感i染病毒性疾病。廣州勱博--養(yǎng)殖場核酸提取純化傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點PCR來對樣品中的模板量進行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的最終擴增產(chǎn)物。非洲病毒(ASFV)通過直接或間接接觸傳播,在豬群眾傳播速度極快。而且,該病毒在未經(jīng)烹飪的生豬相關(guān)制品中存活時間很長,這一特點使得非洲容易向未感i染區(qū)域傳播。由于非洲可以感i染,而軟蜱通過叮咬成為非洲主要傳播途徑之一,這也給非洲的凈化帶來難度。非洲的感i染致死率極高,接近,并且目前沒有有效的疫i苗和治i療手段。PCR技術(shù)在傳i染病診斷上具有廣泛的應(yīng)用,該技術(shù)靈敏度高,特異性強,能夠在豬、豬產(chǎn)品及環(huán)境中病毒的“蹤跡”進行有效的監(jiān)控,是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指i定的非洲首i選診斷技術(shù)。