熒光分光光度計(jì)種類

熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段；熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辨測定的熒光分光光度計(jì)等。

熒光光譜特點(diǎn)

靈敏度更高  g/ml，應(yīng)用不如UV廣泛。應(yīng)用：①直接熒光光度法②作為HPLC的檢測器（用的多）根據(jù)物質(zhì)分子吸收光譜和熒光光譜能級(jí)躍遷機(jī)理，具有吸收光子能力的物質(zhì)在特定波長光（如紫外光）照射下可在瞬間發(fā)射出比激發(fā)光波長長的光，即熒光。 分子受特定光照射后處于激發(fā)態(tài)的 分子返回基態(tài)時(shí)發(fā)出熒光, 其熒光強(qiáng)度與 呈線性關(guān)系, 從而可測出氣體濃度。當(dāng)檢測儀器系統(tǒng)確定后，熒光總光強(qiáng)I與 濃度的之間的關(guān)系可表示為：I=KC在穩(wěn)定的條件下，這些參數(shù)也隨之確定，k可視為常數(shù)。因此，式中I=kC表示的紫外熒光光強(qiáng)I與樣氣的濃度C成線性關(guān)系。這是紫外熒光法進(jìn)行定量檢測的重要依據(jù)。

熒光光譜儀

根據(jù)波茲曼 （Boltzmann）分布，分子在室溫時(shí)基本上處于 電子能級(jí)的基態(tài)。當(dāng)吸收了紫外-可見光后，基態(tài)分子中的電子只能躍遷到激發(fā)單重態(tài)的各個(gè)不同振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)，根據(jù)自旋禁阻選律, 不能直接躍遷到激發(fā)三重態(tài)的各個(gè)振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，通常以輻射躍遷和無輻射躍遷等方式釋放多余的能 量而返回至基態(tài)，發(fā)射熒光是其中的一條途徑。振動(dòng)弛豫（vibrational relexation）是處于激發(fā)態(tài)各振動(dòng)能級(jí)的分子通過與溶劑分子的碰攛而將部分振動(dòng)能量傳遞給溶劑分子，其電子則返回到同一電子激發(fā)態(tài)的低振動(dòng)能級(jí)的過程。由于能量不是以光輻射的形式放出，故振動(dòng)弛豫屬于無輻射躍遷。振動(dòng)弛豫只能在同一電子能級(jí)內(nèi)進(jìn)行，發(fā)生振動(dòng)弛豫的時(shí)間約為 秒數(shù)量級(jí)。內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換（ internal conversion）簡稱內(nèi)轉(zhuǎn)換，是當(dāng)兩個(gè)電子激發(fā)態(tài)之間的能量相差較小以致其振動(dòng)能級(jí)有重疊時(shí)，受激分子常由高電子能級(jí)以無輻射方式轉(zhuǎn)移至低電子能級(jí)的過程。

淺析熒光光譜

無論分子初處于哪一個(gè)激發(fā)單重態(tài)，通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及振動(dòng)弛豫，均可返回到激發(fā)單重態(tài)的低振動(dòng)能級(jí)，然后再以輻射形式發(fā)射光而返回至基態(tài)的任一振動(dòng)能級(jí)上,這時(shí)發(fā)射的光稱為熒光。由于振動(dòng)弛豫和內(nèi)轉(zhuǎn)換損失了部分能童，故熒光的波長總比激發(fā)光波長要長。發(fā)射熒光的過程為 秒。由于電子返回基態(tài)時(shí)可以停留在基態(tài)的任一振動(dòng)能級(jí)上，因此得到的熒光譜線有時(shí)呈現(xiàn)幾個(gè)非?？拷姆?。通過進(jìn)一步振動(dòng)弛豫，這些電子都很快地回到基態(tài)的低振動(dòng)能級(jí)。