ELISA試劑盒的應(yīng)用技術(shù)

ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

ELISA試劑盒的發(fā)展前景

臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。分子生物學(xué)正在并肯定會讓對整個生命科學(xué)有一個徹底的認(rèn)識，其對測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對以些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

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Elisa試劑盒實驗原理

將目標(biāo)包被于微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)，將未結(jié)合的生物素洗凈后，加入HRP標(biāo)記和親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

Elisa試劑盒原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的米松（Dexamethasone，DEX），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的米松藥品和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗米松藥類，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。