熒光定量PCR儀的相關介紹

PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)方式生成模板，從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物，因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。

在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關的熒光信號，隨著反應時間的進行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產物的量，并且由此來推斷模板當初的含量。

熒光定量PCR儀的產前診斷應用

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到目前為止，人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法治，只能通過產前監(jiān)測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法，易為孕婦所接受。

熒光定量PCR的原理

萊普特——熒光定量PCR儀專業(yè)供應商，我們?yōu)槟峁┮韵滦畔ⅰ?/span>

PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步?；蛘呤褂脽晒馊玖蟂YBR。SYBR可以結合到雙鏈DNA上面，當體系中的模板被擴增時，SYBR可以有效結合到新合成的雙鏈上面，隨著PCR的進行，結合的SYBR染料越來越多，被儀器檢測到的熒光信號越來越強，從而達到定量的目的。