蛋白結(jié)晶自動(dòng)化

1.能夠進(jìn)行多種不同方法的加樣：氣相擴(kuò)散法（包括坐滴法和懸滴法）； 2.坐滴懸滴蛋白以及篩選液的加樣針頭為八通道，針頭必須可自動(dòng)清洗重復(fù)使用，也必須可自動(dòng)更換； 3.儀器具有全自動(dòng)濕度控制功能，儀器內(nèi)部帶有濕度感應(yīng)器，實(shí)時(shí)控制濕度，并且軟件界面實(shí)時(shí)顯示濕度數(shù)據(jù)，有效控制樣本液體揮發(fā)，提高實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性；（gryphon沒(méi)這個(gè)功能） 4.至少有三個(gè)微孔板位和一個(gè)深孔板位；后期能擴(kuò)展升級(jí)，增加樣本池液整板分配功能，可自動(dòng)從深孔板分配到微孔板。 5.八通道加樣頭須具備獨(dú)立傳感器，確保點(diǎn)樣，并有效防止漏點(diǎn)和誤操作，更好地適應(yīng)板面高低不平產(chǎn)生的誤差； 6. 大和小加樣容量：坐滴盤(pán)和懸滴盤(pán)：60nL – 1200nL； 7.加樣時(shí)間：96孔標(biāo)準(zhǔn)盤(pán)（坐滴盤(pán)和懸滴盤(pán)）：≤5分； 8.兼容市面上所有的96孔標(biāo)準(zhǔn)盤(pán)（坐滴盤(pán)和懸滴盤(pán)）； 9.加樣精度：無(wú)論液體種類(lèi)和粘度100nl時(shí)CV＝５%； 10.加樣模式：可以一次吸取多次加樣； 11.機(jī)械定位精度：Z方向=50um； X, Y方向200um； 12.加樣區(qū)域完全封閉，無(wú)外界干擾。

蛋白質(zhì)晶體板制作

設(shè)計(jì)并制作了一種在微腔中對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行微批量法(microbatch)結(jié)晶的碟式微流控結(jié)晶芯片,它是一種高通量、低成本、低耗樣量(納升級(jí))、操作簡(jiǎn)便的蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選方法,這種芯片能成功地結(jié)晶溶菌酶(lysozyme)和青色熒光蛋白(CyPet).為了系統(tǒng)地比較這種微流控芯片與傳統(tǒng)的使用蒸汽擴(kuò)散法的24孔結(jié)晶板的結(jié)晶能力,用3個(gè)Hampton結(jié)晶試劑盒,在4℃及20℃培養(yǎng)條件下分別對(duì)5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白(溶菌酶(lysozyme)、木聚糖酶(xylanase)、脂肪酶B(lipase B)、葡萄糖異構(gòu)酶(glucose isomerase)和嗜熱菌蛋白酶(thermolysin))進(jìn)行了結(jié)晶篩選實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明,在4℃時(shí)微流控芯片與24孔結(jié)晶板有相近數(shù)目的結(jié)晶條件(91 vs 98)。

蛋白質(zhì)晶體板

重組蛋白技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)晶、蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)相互作用及結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中具有非常重要的作用。當(dāng)前對(duì)重組蛋白的純化,目前常采用固定化金屬離子親和色譜(IMAC)技術(shù),即通過(guò)IMAC材料上的金屬離子與組氨酸標(biāo)簽之間的螯合作用實(shí)現(xiàn)帶組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白的純化,但是由于IMAC材料上金屬離子暴露在材料表面,任何能與金屬離子產(chǎn)生螯合作用的蛋白質(zhì)均獲在IMAC上,如表面富含組氨酸。

蛋白結(jié)晶板

盡管近些年來(lái)在蛋白質(zhì)結(jié)晶的理論、方法和技術(shù)上已取得巨大發(fā)展,獲得衍射良好的蛋白質(zhì)晶體仍然是利用X-射線解析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的一個(gè)主要瓶頸問(wèn)題。這里我們發(fā)展了一種新型的蛋白質(zhì)結(jié)晶方法—固液界面方法,即SLIM。該方法主要包括兩個(gè)部分1)預(yù)先加入并干燥蛋白質(zhì)母液;2)進(jìn)行晶體生長(zhǎng)的時(shí)候,直接將蛋白質(zhì)溶液加入'干母液'中,從而產(chǎn)生一個(gè)固體(干母液)和液體(蛋白質(zhì)溶液)的界面。該方法不僅操作簡(jiǎn)單、快速,而且降低了對(duì)蛋白質(zhì)溶液濃度的要求。