等溫核酸試劑盒

核酸試劑盒的原理

核酸檢測，其實(shí)就是通過檢測熒光信號(hào)的累積來確定樣本中是否有病毒核酸?，F(xiàn)在核酸檢測試劑盒（多重?zé)晒釸T-PCR法），能夠?qū)崿F(xiàn)一小時(shí)快速診斷。

根據(jù)銳科技發(fā)布的文章《如何進(jìn)行核酸檢測帶你揭秘全過程》，目前的病毒核酸檢測試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測原理是以病毒的基因序列為檢測靶標(biāo)，通過PCR擴(kuò)增，使我們的選擇這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來的靶基因越多，累計(jì)的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。

重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)是近年來建立起的一種新的核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、可在短時(shí)間內(nèi)快速擴(kuò)增出目的片段等優(yōu)點(diǎn)，在動(dòng)物疾病早期診斷、現(xiàn)地檢測、進(jìn)出口快速檢疫等方面具有良好的應(yīng)用前景。通過綜述RPA技術(shù)及其在病毒性豬病快速檢測中的應(yīng)用研究進(jìn)展，以期為更好地防控豬病提供參考。

如何提高擴(kuò)增曲線的可重復(fù)性?

優(yōu)化擴(kuò)增曲線考慮以下因素: 對于低拷貝數(shù)模板，不穩(wěn)定擴(kuò)增可能是因?yàn)檫_(dá)到檢測限或者是反應(yīng)混勻程度不同（未混勻的反應(yīng)擴(kuò)增效率不佳）。另外，在低溫情況下存貯，重組酶和輔助蛋白在50%甘油情況下形成沉淀,也是可能導(dǎo)致不穩(wěn)定擴(kuò)增的原因。所以，20x核心反應(yīng)mix在室溫下解凍并震蕩渦旋將使其成為液體，不影響其功能,并且有效提高擴(kuò)增效率。不穩(wěn)定擴(kuò)增也可能是因?yàn)閙aster mix量不足，在加入體系前，用戶必須保證震蕩后20x核心反應(yīng)組分均一。

“一般來說，核酸檢測是目前準(zhǔn)確的診斷方法。”有人告訴記者，核酸檢測試劑盒出現(xiàn)假陰性，即沒有發(fā)現(xiàn)隱藏的病毒，可能與兩個(gè)方面有關(guān)。一是樣品沒有采集到。這一點(diǎn)很容易理解。例如，咽拭子采樣時(shí)人比較難受，深度不夠可能會(huì)采集不到含有病毒的樣本。但這樣的情況應(yīng)該很少發(fā)生。

另一個(gè)假陰性的原因是核酸檢測試劑盒的探針和引物質(zhì)量有波動(dòng)，特別是定量的不造成檢測的不準(zhǔn)確。換句話說，由于這一次各家核酸檢測試劑盒供應(yīng)商都是臨時(shí)啟動(dòng)，有些準(zhǔn)備不足，或是執(zhí)行規(guī)定步驟不到位，導(dǎo)致在生產(chǎn)過程中不進(jìn)行定位，或是酶活性不足，或是酶中含有抑制酶鏈反應(yīng)的重金屬離子等，都可能造成檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰性。