ELISA試劑盒的組成結(jié)構(gòu)

1、 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測。

ELISA試劑盒的操作方法——間接法

以下是北京中檢維康生物技術(shù)有限公司為您一起分享的內(nèi)容，北京中檢維康生物技術(shù)有限公司專業(yè)供應ELISA試劑盒，歡迎新老客戶蒞臨。

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.然后用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

ELISA試劑盒的安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

ELISA試劑盒——會出現(xiàn)的問題及解決辦法

陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

c.原因：添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。