細(xì)胞實(shí)驗(yàn)介紹——細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)：

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測(cè)方法。在長(zhǎng)滿的細(xì)胞培養(yǎng)板或者培養(yǎng)皿中，沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線，去除中線的細(xì)胞，細(xì)胞在0h、12h、24h后，觀察細(xì)胞往中線遷移情況，判斷細(xì)胞遷移能力。

一般流程：細(xì)胞接種培養(yǎng)-劃痕-不同時(shí)間點(diǎn)拍照

細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移和侵襲能力的檢測(cè)方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中，將細(xì)胞接種于小室中，利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力的差異。

一般流程：transwell小室準(zhǔn)備-細(xì)胞接種-細(xì)胞培養(yǎng)-transwell小室染色-顯微鏡拍照

結(jié)果示例：

                                       圖 A 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)圖；B，C 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)圖

骨sui內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)

方法:使用密度梯度離

心法汲差速貼壁法聯(lián)合的方法培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及形態(tài)變化，使用Dil標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標(biāo)記的荊豆凝集素1雙熒光染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原CD34、CD133 表達(dá)情況.結(jié)果與結(jié)論:培養(yǎng)前4 d細(xì)胞增殖不明顯第5~10天迅速增殖，并可見細(xì)胞集落及線狀結(jié)構(gòu)形成培養(yǎng)第7天的內(nèi)皮祖細(xì)胞具有吞噬Dil標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標(biāo)記的荊豆凝集素1的功能流式細(xì)胞儀檢測(cè)體外培養(yǎng)第十天的細(xì)胞,CD133 細(xì)胞占19.2%,CD34 細(xì)胞占28.7%,CD34 /CD133 細(xì)胞占19.1%.說明密度梯度離心法聯(lián)合差速貼壁法可在體外有效分離培養(yǎng)大鼠骨sui內(nèi)皮祖細(xì)胞.

磁性細(xì)胞標(biāo)記方式

應(yīng)用MACS技術(shù)進(jìn)行磁性細(xì)胞分選重要的一點(diǎn)是高質(zhì)量的標(biāo)記。要盡可能地增強(qiáng)陽性細(xì)胞的標(biāo)記，并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標(biāo)記方式:直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。

1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Direct magnetic cell labeling)

(磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞)直接標(biāo)記是快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長(zhǎng)類細(xì)胞的MACS直標(biāo)微珠可供選用。

2、間接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Indirect magnetic cell labeling )

(磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞,游離于磁場(chǎng)的細(xì)胞為所需細(xì)胞)間接磁性細(xì)胞標(biāo)記需要聯(lián)合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和MACS間標(biāo)微珠。未結(jié)合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標(biāo)記抗ti均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。幾乎針對(duì)任何種系任何細(xì)胞的任何一種單抗或多抗,均可用于間接標(biāo)記。間接標(biāo)記主要在如下情況時(shí)選用:當(dāng)沒有直標(biāo)磁珠時(shí);需要用幾種抗ti的混合物同時(shí)分選或去除多種類型的細(xì)胞;間接標(biāo)記有放大作用,因此可在磁性分選抗原表達(dá)弱的目的細(xì)胞時(shí)使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。( -般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大，陽性分離法用行更多。)