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相對(duì)于弱酸性化合物而言，弱堿性化合物在陽(yáng)離子交換固相萃取過(guò)程中99%的分解都是陽(yáng)離子，這一弱堿性化合物所處的環(huán)境系統(tǒng)的 pH值必須低于其 pKa至少兩個(gè) pH單位。洗脫時(shí)，環(huán)境體系的 pH值應(yīng)高于化合物的 pKa值至少兩個(gè) pH單位，99%的化合物此時(shí)為中性狀態(tài)，可通過(guò)適當(dāng)?shù)娜軇年?yáng)離子交換柱中洗脫。

選擇離子交換固相萃取柱的種類：為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物，對(duì)于含有強(qiáng)離子官能團(tuán)的目標(biāo)化合物，一般選用弱離子交換柱；對(duì)于含有弱離子官能團(tuán)的化合物，一般選用強(qiáng)離子交換柱。該方法可避免目標(biāo)化合物與吸附劑官能團(tuán)同時(shí)處于離子化狀態(tài)，使目標(biāo)化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態(tài)。

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反相式C18分離柱

C18是十八烷基碳鏈上的反相固定相的統(tǒng)稱。除以普通硅膠為基質(zhì)外，以C18鏈為基質(zhì)的高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯等反相固定相，均可稱為C18鏈。有很多種類型的C18，常見的C18是硅膠基質(zhì)，稱為 ODS,C18能夠在純水中工作，被稱為C18-AQ。

C18反相柱的固定相為非極性固定相，流動(dòng)相極性大于固定相極性，常用的溶劑一般為水和甲1醇、乙1腈、四氫呋1喃、異丙1醇等與水互溶的溶劑，適合分離非極性或弱極性的化合物，其洗脫順序一般為樣品極性從高到低。

反相分離柱C18的適用范圍

C18反相分離柱廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取，藥1物合成研究與開發(fā)，生物制藥等領(lǐng)域。若樣品極性偏大， Rf值非常接近，則不能分離正相模式；終產(chǎn)物要求純度98%以上，采用正相模式達(dá)不到；樣品在正相條件下存在溶解問(wèn)題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術(shù)的成熟和良好的分離能力，C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。

反相式C18反相分離柱的主要參數(shù)

分離柱C18有多種參數(shù)，大致可分為四個(gè)方面：相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內(nèi)徑、柱長(zhǎng))和隱藏參數(shù)(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個(gè)大家容易忽略的

反向作用機(jī)制：

反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。

對(duì)利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物，可用氯1仿、環(huán)己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強(qiáng)度足夠大，可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時(shí)，使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強(qiáng)的甲1醇，對(duì)許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來(lái)洗脫它。有時(shí)候，單種溶劑無(wú)法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物，可以考慮使用二氯甲1烷：乙1酸乙1酯(1:1，體積比)。

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一般來(lái)說(shuō)，我們需要分離的混合物的性質(zhì)各不相同，很難通過(guò)調(diào)整 PH來(lái)達(dá)到要求。一般而言，在改變流動(dòng)相 PH的基礎(chǔ)上，又加入緩沖鹽以改變組分的選擇性和分離程度。大多數(shù)C18反相分離柱在使用

一、強(qiáng)酸淋洗、強(qiáng)堿

用硅膠作載體的粘結(jié)相填料，其使用要求是：流動(dòng)相 PH值在2.5-7.5之間。在 PH<2時(shí)，流動(dòng)相可能與載體硅膠和合相發(fā)生水解反應(yīng)，從而導(dǎo)致碳鏈損失；在 PH<7時(shí)，流動(dòng)相可能使載體硅膠溶解。因此，硅膠基體C18 (即 ODS)在強(qiáng)堿條件下基本壽命較短，聚合體C18雖然能在高堿性條件下穩(wěn)定工作，但其價(jià)格昂貴，分離性能及模組強(qiáng)度均不如 ODS。

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改進(jìn)凈化方式

在一般情況下，目標(biāo)化合物模式比雜質(zhì)模式的凈化效果要好，如果要分析的是某種特定種類的化合物，則較好是用保留目標(biāo)化合物的模式來(lái)分析；舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，也就是對(duì)蔬菜中的多菌靈和塞菌靈(一類堿性農(nóng)1藥)進(jìn)行分析，用陽(yáng)離子交換柱可專一性地保留這些農(nóng)1藥，使其與干擾物基本完全分離，而用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作只能去除主要的干擾物，保留干擾物的數(shù)量較多。

此外，如果可以用多個(gè) SPE柱對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行凈化，應(yīng)選擇選擇性好的吸附劑；選擇性越高，離子交換>正相>反相。