平板菌落計數(shù)法測定水中細(xì)菌總數(shù)

城市供水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)有所提高，自來水中細(xì)菌菌落數(shù)不得超過80CFU/mL，任意取100mL水樣不得檢出大腸桿菌。因此，對水中的細(xì)菌數(shù)量及大腸菌群數(shù)的檢驗是保證飲用水安全和控制的有效手段，同時也是評價水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。本實驗采用平板菌落計數(shù)法測定水中細(xì)菌總數(shù)。其方法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋，涂布在平板上，經(jīng)培養(yǎng)后在平板上形成肉眼可見的菌落。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣量計算出樣品中的細(xì)菌數(shù)量。

細(xì)菌總數(shù)測定自來水加樣

細(xì)菌總數(shù)測定

自來水

加樣：用無菌吸管吸取1mL水樣，注入無菌培養(yǎng)皿中。每個水樣重復(fù)三皿。

制平板：分別傾注約15mL已溶化并冷卻到45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，蓋上皿蓋，立即輕輕旋轉(zhuǎn)搖動，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻，平放待凝。另取一空的無菌培養(yǎng)皿，傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15mL，作空白對照。

培養(yǎng)：平板凝固后，倒置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h。

乳糖蛋白水培養(yǎng)基的試管

1）自來水①初發(fā)酵：取2個裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨水培養(yǎng)基的三角燒瓶，各加入100mL水樣；取10支裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨水培養(yǎng)基的試管，各加入10mL水樣。混勻后，于37℃培養(yǎng)24h（24h未產(chǎn)氣的繼續(xù)培養(yǎng)至48h）。②平板分離：將24h培養(yǎng)后產(chǎn)酸、產(chǎn)氣及48h培養(yǎng)后產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的發(fā)酵管（瓶）中的菌液，分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于37℃培養(yǎng)18～24h，將符合下列特征的菌落進(jìn)行涂片、革蘭氏染色和鏡檢：（a）深紫黑色、有金屬光澤；（b）紫黑色、不帶或略帶金屬光澤；（c）淡紫紅色、中心顏色較深。③酵：經(jīng)涂片、染色和鏡檢后，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取該菌落，重新接種于普通濃度的乳糖蛋白胨水培養(yǎng)基試管中，每管可接種同類型菌落1～3個，于37℃培養(yǎng)24h，若結(jié)果是產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，即證實有大腸菌群存在。根據(jù)初發(fā)酵試驗的陽性管（瓶）數(shù)查附表11-2，即得大腸菌群數(shù)。

多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群的操作方法

池水、河水或湖水①稀釋水樣：將水樣稀釋成10-1與10-2。②初發(fā)酵：分別吸取1mL10-2、10-1的稀釋水樣和1mL原水樣，注入裝有10mL普通濃度乳糖蛋白胨試管中。另取10mL和100mL原水樣，分別注入裝有5mL和50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨水培養(yǎng)基的試管和三角燒瓶中。③以下步驟同上述“自來水”的平板分離和酵試驗。所加水樣體積為100、10、1、0.1mL的發(fā)酵管結(jié)果；水樣體積為10、1、0.1、0.01mL的發(fā)酵管結(jié)果，即得每升水樣中的大腸菌群數(shù)。