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發(fā)布時(shí)間:2020-12-20 05:42  
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一個(gè)豬場(chǎng)對(duì)進(jìn)場(chǎng)人員的衣物進(jìn)行熏蒸消毒,專門制作了一個(gè)消毒柜,但由于開(kāi)始設(shè)計(jì)不理想,消毒柜太大,無(wú)法進(jìn)入屋內(nèi),就放在了舍外。夏秋季節(jié)消毒沒(méi)什么問(wèn)題,但到了冬天,他們?nèi)匀辉谏嵬庋粝荆@樣的效果是很差的。專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測(cè)模塊,用于監(jiān)測(cè)擴(kuò)增時(shí)的熒光,檢測(cè)到的熒光信號(hào)反映了每個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。還有的在入舍消毒池中,只是例行把水和火堿放進(jìn)去,也不攪拌,火堿靠自身溶解需要較長(zhǎng)時(shí)間,那剛放好的消毒水的作用就不確實(shí)了。
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現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明,在豬日糧中,豬流行性腹瀉病毒和其他外來(lái)病毒等能很好存活的原料包括:豆粕、酒糟、豬源蛋白質(zhì)、維生素預(yù)混料、氨化膽i堿、L-賴氨酸和DL-蛋氨酸。如果其他尚未被評(píng)估的原料符合以下標(biāo)準(zhǔn)就更有利于病毒存活:蛋白質(zhì)含量高(特別是天然蛋白質(zhì))、豬源、相對(duì)表面積較大質(zhì)量(比)、含有載體的微成分。目前在real-timeQ-PCR中最廣泛使用的TaqMan系統(tǒng)就是運(yùn)用了這個(gè)原理。值得注意的是,這些原料并非具有相同的污染風(fēng)險(xiǎn)。
廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始DNA拷貝數(shù)。
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QF-PCR技術(shù)在國(guó)外已有較廣泛的應(yīng)用,但目前尚未在國(guó)內(nèi)產(chǎn)前診斷臨床中普遍開(kāi)展。為規(guī)范使用QF-PCR技術(shù),由國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委i員會(huì)召集、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心主辦的"全國(guó)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)管理規(guī)范編制研討會(huì)"于2015年11月14日在成都召開(kāi),會(huì)議就QF-PCR等快速產(chǎn)前診斷技術(shù)的臨床應(yīng)用進(jìn)展及其在國(guó)內(nèi)應(yīng)用中存在的具體問(wèn)題進(jìn)行了深入而廣泛的探討,并形成了QF-PCR技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用專家共識(shí)。目前,對(duì)一些培養(yǎng)周期長(zhǎng)或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測(cè)手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測(cè),為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對(duì)病原體的檢測(cè)克服了免i疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期“問(wèn)題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。
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熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理: 隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。PCR檢測(cè)雖不需要熒光顯微設(shè)備,但也需要相關(guān)設(shè)備,可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速非瘟檢測(cè)技術(shù)。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè) 產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
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相對(duì)定量可以對(duì)每個(gè)樣本中模版的其實(shí)水平之間的差異進(jìn)行精i確比較,沒(méi)必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對(duì)水平不用使用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以確定。相對(duì)定量分析以實(shí)時(shí)PCR方式執(zhí)行,在實(shí)時(shí)PCR分析過(guò)程中,PCR基因擴(kuò)增一直在監(jiān)控中,在PCR進(jìn)行期間進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,而不是在PCR結(jié)束時(shí)(終點(diǎn)PCR)才獲取數(shù)據(jù)。在反應(yīng)體系中加入熒光分子,通過(guò)熒光信號(hào)的按比例增加來(lái)反應(yīng)DNA量的增加,使PCR產(chǎn)物的實(shí)時(shí)檢測(cè)成為可能。在實(shí)時(shí)PCR中,反應(yīng)是在目標(biāo)的擴(kuò)增早被監(jiān)測(cè)到時(shí)用循環(huán)中的時(shí)間點(diǎn)來(lái)描述的,而不是在PCR結(jié)束時(shí)通過(guò)目標(biāo)的累計(jì)數(shù)來(lái)描述。
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在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過(guò)溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異?;蛘吒鶕?jù)實(shí)際情況,在生豬進(jìn)場(chǎng)前以生豬運(yùn)輸車輛為單位采集全部生豬血液樣品,混合后進(jìn)行檢測(cè)。