然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)



終止液（3M　H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入（98%）21.7ml。（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M檸檬酸（19.2克/L）　 24.3ml加蒸餾水50ml。（6）　TMB（四）使用液:TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）　 10ml0.75%H2O2　 　32μl（7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg底物緩沖液（PH5.5）　 1ml3%H2O2　 　2μl（8）　抗原、和酶標(biāo)記。（9）　正常人和陽性對照。



做好對照正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊、兔或BSA等封閉。實驗條件的選擇在ELISA中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:（1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。

需要而未提供的試劑和器材1. （450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

技術(shù)團(tuán)隊具有在該領(lǐng)域5年以上的理化測定經(jīng)驗，時時關(guān)注相關(guān)科研方向的研究結(jié)果，并與公司的檢測技術(shù)，試劑盒研發(fā)相結(jié)合。