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發(fā)布時(shí)間:2021-10-11 11:49  
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加酶標(biāo):于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“ ”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
器材(1) 聚塑料板(簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,ELISA檢測(cè)儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。(2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。(3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。試驗(yàn)原理試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生物素標(biāo)記的同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。